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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定標(biāo)本中豬細(xì)小病毒CPV,。用純化的豬細(xì)小病毒（CPV）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，可與樣品中細(xì)小病毒（CPV）抗原相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的細(xì)小病毒（CPV）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較,，從而判定標(biāo)本中豬細(xì)小病毒（CPV）的存在與否,。ELISA試劑盒

標(biāo)本要求：

1．標(biāo)本處理：血清、血漿標(biāo)本可直接檢測

2．豬細(xì)小病毒CPV標(biāo)本按要求制備后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。如不能及時(shí)檢測,，可將標(biāo)本在-20℃保存一個(gè)月，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

3．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：

1.         編號(hào)：將樣品對應(yīng)微孔按序編號(hào),，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔,、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）

2.         加樣：分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照（標(biāo)準(zhǔn)品）50μl,。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻，

3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。  

4.         配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。

7.         溫育：操作同3,。

8.         洗滌：操作同5。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl,，再加入顯色劑B 50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘

10.     終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11.     測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

注意事項(xiàng)

1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

4．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存,。

6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),，使用雙波長檢測時(shí)，參考波長為630nm

7．豬細(xì)小病毒CPV所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須注意安全,。

BNC2    堿性核蛋白2(鋅指蛋白basonuclin2)抗體
BCL7C    B細(xì)胞白血病/淋巴瘤蛋白7抗體
BSCL2    先天性脂肪代謝障礙蛋白2抗體（常染色體顯性遺傳痙攣性截癱17）
BTG1    B細(xì)胞遷移基因1抗體
BEAN1    脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)蛋白BEAN1抗體
B7-H6    B7H6蛋白抗體
BOb-1    B細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子抗體
BIN1    橋連整合因子蛋白抗體
BADH2    BADH2抗體(水稻)
BCHE(1E8)    丁酰膽堿酯酶單克隆抗體
phospho-beta catenin (Tyr142)    磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體

ELISA試劑盒