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細胞凋亡檢測方法說明

閱讀:153          發(fā)布時間:2016-3-11

細胞凋亡檢測方法ELISA試劑盒
 
細胞凋亡與壞死是兩種*不同的細胞凋亡形式,根據(jù)死亡細胞在形態(tài)學,、生物化學和分子生物學上的差別,,可以將二者區(qū)別開來。細胞凋亡的檢測方法有很多,下面介紹幾種常用的測定方法,。
一,、細胞凋亡的形態(tài)學檢測
根據(jù)凋亡細胞固有的形態(tài)特征,人們已經(jīng)設計了許多不同的細胞凋亡形態(tài)學檢測方法,。
1 光學顯微鏡和倒置顯微鏡
(1) 未染色細胞:凋亡細胞的體積變小,、變形,細胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象,,細胞凋亡晚期可見凋亡小體,。
貼壁細胞出現(xiàn)皺縮、變圓,、脫落,。
(2) 染色細胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等,。凋亡細胞的染色質濃縮,、邊緣化,核膜裂解,、染色質分割
成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài),。
2 熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡
一般以細胞核染色質的形態(tài)學改變?yōu)橹笜藖碓u判細胞凋亡的進展情況。
常用的DNA特異性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),,HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI,。三種染料與 DNA的結合是非嵌入式的,主要結合在DNA的A-T堿基區(qū),。紫外光激發(fā)時發(fā)射明亮的藍色熒光,。
Hoechst是與DNA特異結合的活性染料,儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,,使用時用PBS稀釋成終濃度為2~5mg/ml,。
DAPI為半通透性,用于常規(guī)固定細胞的染色,。儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,,使用終濃度一般為0.5 ~1mg/ml。
結果評判:細胞凋亡過程中細胞核染色質的形態(tài)學改變分為三期:Ⅰ期的細胞核呈波紋狀(rippled)或呈折縫樣(creased),,部分染色質出現(xiàn)濃縮狀態(tài),;Ⅱa期細胞核的染色質高度凝聚、邊緣化,;Ⅱb期的細胞核裂解為碎塊,,產生凋亡小體

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