技術(shù)文章
細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法說明
閱讀:115 發(fā)布時(shí)間:2016-3-11細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法ELISA試劑盒
細(xì)胞凋亡與壞死是兩種*不同的細(xì)胞凋亡形式,根據(jù)死亡細(xì)胞在形態(tài)學(xué),、生物化學(xué)和分子生物學(xué)上的差別,,可以將二者區(qū)別開來。細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法有很多,,下面介紹幾種常用的測(cè)定方法,。
一,、細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測(cè)
根據(jù)凋亡細(xì)胞固有的形態(tài)特征,人們已經(jīng)設(shè)計(jì)了許多不同的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測(cè)方法,。
1 光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡
(1) 未染色細(xì)胞:凋亡細(xì)胞的體積變小、變形,,細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象,細(xì)胞凋亡晚期可見凋亡小體,。
貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、變圓,、脫落,。
(2) 染色細(xì)胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等,。凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化,,核膜裂解,、染色質(zhì)分割
成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。
2 熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡
一般以細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變?yōu)橹笜?biāo)來評(píng)判細(xì)胞凋亡的進(jìn)展情況,。
常用的DNA特異性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),,HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三種染料與 DNA的結(jié)合是非嵌入式的,,主要結(jié)合在DNA的A-T堿基區(qū),。紫外光激發(fā)時(shí)發(fā)射明亮的藍(lán)色熒光。
Hoechst是與DNA特異結(jié)合的活性染料,,儲(chǔ)存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,,使用時(shí)用PBS稀釋成終濃度為2~5mg/ml。
DAPI為半通透性,,用于常規(guī)固定細(xì)胞的染色,。儲(chǔ)存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,,使用終濃度一般為0.5 ~1mg/ml,。
結(jié)果評(píng)判:細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為三期:Ⅰ期的細(xì)胞核呈波紋狀(rippled)或呈折縫樣(creased),部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài),;Ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚,、邊緣化;Ⅱb期的細(xì)胞核裂解為碎塊,產(chǎn)生凋亡小體