技術(shù)文章
酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)核小體測(cè)定
閱讀:952 發(fā)布時(shí)間:2016-3-7ELISA試劑盒酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)核小體測(cè)定
凋亡細(xì)胞的DNA斷裂使細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)核小體,。核小體由組蛋白及其伴隨的DNA片斷組成,,可由ELISA法檢測(cè),。
(一)檢測(cè)步驟
1,、將凋亡細(xì)胞裂解后高速離心,其上清液中含有核小體,;
2,、在微定量板上吸附組蛋白體’
3、加上清夜使抗組蛋白抗體與核小體上的組蛋白結(jié)合‘
4,、加辣過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗DNA抗體使之與核小體上的DNA結(jié)合’
5,、加酶的底物,測(cè)光吸收制,。
(二)用途
該法敏感性高,,可檢測(cè)5*100/ml個(gè)凋亡細(xì)胞??捎糜谌?、大鼠、小鼠的凋亡檢測(cè),。該法不需要特殊儀器,,適合基層工作,但是不能測(cè)定凋亡細(xì)胞發(fā)生的絕多對(duì)量,。
流式細(xì)胞儀定量分析
(一)檢測(cè)原理
細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),,其細(xì)胞膜的通透性也增加,但是其程度介于正常細(xì)胞與壞死細(xì)胞之間,。利用這一特點(diǎn),,被檢測(cè)細(xì)胞懸液用熒光素染色,利用流式細(xì)胞儀測(cè)量細(xì)胞懸液中細(xì)胞熒光強(qiáng)度來(lái)區(qū)分正常細(xì)胞,、壞死細(xì)胞核凋亡細(xì)胞,。
(二)應(yīng)用價(jià)值
流式細(xì)胞儀檢測(cè)具有以下特點(diǎn):
1)、檢測(cè)的細(xì)胞數(shù)量大,,因此其反映群體細(xì)胞的凋亡狀態(tài)比較準(zhǔn)確
2),、可以做許多相關(guān)性分析
3)、結(jié)合被檢測(cè)細(xì)胞的DNA含量的分析,,可確定凋亡的細(xì)胞所處的細(xì)胞周期