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在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體,，即加標本和加酶結(jié)合物后?？乖贵w反應的完成需要有一定的溫度和時間,，這一保溫過程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育,，在ELISA試劑盒中似不恰當,。

    elisa試劑盒屬固相免疫測定，抗原,、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生,。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標本,，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機會,，只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,，因此需經(jīng)擴散才能達到反應的終點,。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA試劑盒反應總是需要一定時間的溫育,。

    溫育常采用的溫度有43℃,、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等,。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA試劑盒方法作反應動力學研究時,，實驗表明,，兩次抗原抗體反應一般在37℃經(jīng)1-2小時，產(chǎn)物的生成可達,。為加速反應,，可提高反應的溫度，有些試驗在43℃進行，但不宜采用更高的溫度,?？乖贵w反應4℃更為*，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中,，以形成zui多的沉淀,。但因所需時間太長，在ELISA試劑盒中一般不予采用,。

    保溫的方式除有的ELISA試劑盒儀器附有特制的電熱塊外,，一般均采用水浴，可將ELISA試劑盒板置于水浴箱中,，ELISA板底應貼著水面,，使溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā),，板上應加蓋,，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時可讓反應板漂浮在水面上,。若用保溫箱,，ELISA試劑盒板應放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,，在盒底墊濕的紗布,，zui后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規(guī)定的溫度,，特別是在氣溫較低的時候更應如此,。無論是水浴還是濕盒溫育，反應板均不宜疊放,，以保證各板的溫度都能迅速平衡,。室溫溫育的反應，操作時的室溫應嚴格限制在規(guī)定,，標準室溫溫度是指20-25℃,，但具體操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育。室溫溫育時,，ELISA試劑盒板只要平置于操作臺上即可,。應注意溫育的溫度和時間應按規(guī)定力求準確。為保證這一點,，一個人操作時,，一次不宜多于兩塊板同時測定。

    按    elisa試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑,。ELISA中用的蒸餾水或去離子水,，包括用于洗滌的,，應為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應用pH計測量較正,。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用,。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。