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動物細(xì)胞培養(yǎng)實驗的基本要求
閱讀:440 發(fā)布時間:2016-1-11動物細(xì)胞培養(yǎng)實驗的基本要求
①清洗玻璃制品時,浸酸之后一定要用自來水沖洗10~15次,。因為殘存的洗液對細(xì)胞黏附有很大影響,。清洗塑料制品時要用棉花或柔軟紗布擦洗,。千萬不要用硬毛刷,否則損害塑料表面后細(xì)胞不易貼壁,。加樣器頭(Tip)和離心管(Tube)一定要用超聲清洗處理后逐個清洗.如沒有洗凈會影響下一次使用的效果。elisa試劑盒
②干熱滅菌時,,應(yīng)在白天使用烤箱,并不斷觀察,,以免發(fā)生意外。當(dāng)溫度超過100℃時,,不能玎開烤箱門,。器皿烤完后,,待溫度降至100℃之下才能開烤箱門,。金屬器械、橡膠和塑料制品不能使用干熱滅菌方法,。
③重高壓滅菌后器皿務(wù)必晾干或烘干,,以防包裝紙潮濕發(fā)霉:
④牛血清、大部分培養(yǎng)基,、胰酶和一些生物制劑(如TdR,,秋水仙素,谷氨酰胺,,異硫氰酸胍,,MOPS等)是有機(jī)溶液,均不能高壓,。
⑤濾過除菌時,,濾器在使用前先裝好濾膜(有時可在上面加一層定性濾紙),包好,,經(jīng)高壓滅菌后才能使用,。濾過酶類制劑時應(yīng)待濾器溫度降至室溫后再進(jìn)行。過濾時壓力不宜過大,,壓力數(shù)字以2為宜,。壓力太大時微孔濾膜可能破裂,,或使某些微生物變形而通過濾膜,。裝濾膜時位置要準(zhǔn)確,。另外濾器包裝時,螺釘不要擰得太緊,,以防高壓蒸汽不能進(jìn)入,,待高壓滅菌之后,再擰緊使用,。
⑥使用化學(xué)消毒法時,,配制。75%,,酒精應(yīng)用衛(wèi)生級,,不要用化學(xué)純、分析純和純酒精,。來蘇兒水不能用于皮膚消毒,,它對皮膚有刺激性??諝庀緯r,,所有的物品要事先準(zhǔn)備齊全并使消毒者有較方便的退出途徑。因為甲醛或乳酸加熱后放出的蒸氣對人的角膜和呼吸道上皮有嚴(yán)重的刺激和傷害作用,。
1)實驗前準(zhǔn)備
實驗前必須分門別類地制訂操作卡片,,如清洗卡、消毒卡,、細(xì)胞常用液(細(xì)胞培養(yǎng)液,、BSS液、消化液)配制卡,、牛血清檢測分裝卡,、細(xì)胞原代和傳代操作卡等:各卡片上注明實驗所需器材的名稱、規(guī)格,、數(shù)量,、操作要領(lǐng)和實驗注意事項等。實驗前應(yīng)按卡片收集,、清點所需用品,,一并放入超凈臺內(nèi),這樣可避免操作時因物品不全而往返拿取所造成的污染:同時,,根據(jù)每個實驗的要求,,準(zhǔn)備好瓶管支架、器械消毒盒等,。實驗器材準(zhǔn)備數(shù)要大于實驗使用數(shù),,瓶蓋數(shù)要大于瓶數(shù)。這樣才能有條不紊地做實驗,,也減少了忙亂操作所引起的污染,。
2)無菌室和操作室消毒
無菌室內(nèi)每周用乳酸蒸氣(或過氧乙酸)加紫外線消毒1~2次,。實驗前,將實驗器材放入超凈臺內(nèi),,打開超凈臺紫外線燈,同時啟動超凈臺風(fēng)機(jī),,40 min后消毒完畢,,關(guān)閉紫外線燈。這樣,,超凈臺內(nèi)空氣被凈化,,超凈臺面構(gòu)成相對無菌的環(huán)境。
3)無菌操作要求
①手指不能觸及器材使用端,。如觸及,,器材需更換或燒灼后再使用(如瓶口)。
②減少手與器材的接觸面,,學(xué)會手指操作,。
③一切操作,如打開或封閉瓶口,,安裝吸管,、注射器等,都要在火焰前方進(jìn)行,。瓶口,、吸管、注射器使用前要經(jīng)過火焰消毒后使用,。
④瓶口順風(fēng)斜放在支架上,。試劑用后立即封閉瓶口。瓶口長時間敞開會增加落菌的機(jī)會,。
⑤不同的細(xì)胞同時操作時,,要專管,并要勤換吸管,,防止擴(kuò)大污染和交叉污染,。
⑥瓶口液滴不能倒回瓶內(nèi)。液滴用干酒精棉球擦拭,,瓶口再經(jīng)火焰消毒,。
⑦操作者動作要準(zhǔn)確敏捷,盡量避免空氣流動,。
elisa試劑盒
4)實驗中操作要求
洗手,、著裝與外科臨床要求相同。雙手用肥皂洗凈后浸泡于消毒液中,,并用75%的酒精擦拭,。細(xì)胞培養(yǎng)用液從冰箱取出,,試劑瓶口和外壁經(jīng)酒精紗布擦洗后入超凈臺。超凈臺面要用酒精紗布擦拭,。超凈臺上的物品面布局合理,,污物廢液缸、酒精棉球缸在右側(cè)位,,酒精燈在中央位,,試劑瓶在左側(cè)位。拆除大包裝,,點燃酒精燈(95%酒精),。火焰無色或微黃色表示酒精雜質(zhì)少,,酒精燃燒*(不能使用廢酒精或工業(yè)酒精,,這類酒精燃燒時產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)易附著到吸管或其他瓶、皿上,,帶入培養(yǎng)液中會傷害細(xì)胞),。浸泡。75%酒精中的金屬器械用臺面消毒鑷子取出,,經(jīng)無菌干紗布擦拭后,,迅速通過火焰(器械不能在火焰中灼燒過長時間),冷卻后使用,,避免燙傷細(xì)胞,。細(xì)胞培養(yǎng)液、牛血清,、酶液的吸管,,使用后不能再用火焰消毒,因為吸管中殘留的培養(yǎng)液被燒焦碳化,,再使用時,,會把有害碳化物帶人培養(yǎng)液中毒害細(xì)胞。操作中手指被污染時,,可用酒精紗布或棉球擦拭,。在實驗過程中,不要面向操作臺講話或咳嗽,,避免將唾沫中微生物帶入超凈臺內(nèi),,污染空氣。實驗者離開超凈臺時,,立即用肘關(guān)節(jié)關(guān)閉側(cè)窗口.避免無菌室內(nèi)細(xì)菌隨空氣流人凈化操作區(qū),。elisa試劑盒
5)實驗后要求
實驗完畢,關(guān)閉超凈臺風(fēng)機(jī)和電源,,未使用過的器材放入飯盒內(nèi),,用過的玻璃器材投入清水中浸泡,,包裝紙疊卷,繩成束分類歸入,,zui后,,超凈臺面用酒精紗布或棉球擦拭,紫外線消毒,。
6)注意事項
無菌操作離不開火和酒精,,操作中避免事故發(fā)生。要用打火機(jī)點火,。火柴點火時,,火星德滅后投入廢缸內(nèi)(缸內(nèi)有廢酒精棉球),。酒精濺出臺面或瓶外壁時,立即擦干,;一旦發(fā)生著火事故,,立即關(guān)閉超凈臺風(fēng)機(jī),用飯盒,、濕布撲滅火焰,。