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技術(shù)文章

動物細(xì)胞培養(yǎng)實驗的基本要求

閱讀:437          發(fā)布時間:2016-1-11

動物細(xì)胞培養(yǎng)實驗的基本要求

①清洗玻璃制品時,浸酸之后一定要用自來水沖洗10~15次,。因為殘存的洗液對細(xì)胞黏附有很大影響,。清洗塑料制品時要用棉花或柔軟紗布擦洗。千萬不要用硬毛刷,,否則損害塑料表面后細(xì)胞不易貼壁,。加樣器頭(Tip)和離心管(Tube)一定要用超聲清洗處理后逐個清洗.如沒有洗凈會影響下一次使用的效果。elisa試劑盒

②干熱滅菌時,,應(yīng)在白天使用烤箱,,并不斷觀察,以免發(fā)生意外,。當(dāng)溫度超過100℃時,,不能玎開烤箱門。器皿烤完后,,待溫度降至100℃之下才能開烤箱門,。金屬器械、橡膠和塑料制品不能使用干熱滅菌方法,。

③重高壓滅菌后器皿務(wù)必晾干或烘干,,以防包裝紙潮濕發(fā)霉:

④牛血清、大部分培養(yǎng)基,、胰酶和一些生物制劑(如TdR,,秋水仙素,谷氨酰胺,,異硫氰酸胍,,MOPS等)是有機(jī)溶液,均不能高壓,。

⑤濾過除菌時,,濾器在使用前先裝好濾膜(有時可在上面加一層定性濾紙),包好,,經(jīng)高壓滅菌后才能使用,。濾過酶類制劑時應(yīng)待濾器溫度降至室溫后再進(jìn)行,。過濾時壓力不宜過大,壓力數(shù)字以2為宜,。壓力太大時微孔濾膜可能破裂,,或使某些微生物變形而通過濾膜。裝濾膜時位置要準(zhǔn)確,。另外濾器包裝時,,螺釘不要擰得太緊,以防高壓蒸汽不能進(jìn)入,,待高壓滅菌之后,,再擰緊使用。

⑥使用化學(xué)消毒法時,,配制,。75%,酒精應(yīng)用衛(wèi)生級,,不要用化學(xué)純,、分析純和純酒精。來蘇兒水不能用于皮膚消毒,,它對皮膚有刺激性,。空氣消毒時,,所有的物品要事先準(zhǔn)備齊全并使消毒者有較方便的退出途徑,。因為甲醛或乳酸加熱后放出的蒸氣對人的角膜和呼吸道上皮有嚴(yán)重的刺激和傷害作用。

1)實驗前準(zhǔn)備

實驗前必須分門別類地制訂操作卡片,,如清洗卡,、消毒卡、細(xì)胞常用液(細(xì)胞培養(yǎng)液,、BSS液,、消化液)配制卡、牛血清檢測分裝卡,、細(xì)胞原代和傳代操作卡等:各卡片上注明實驗所需器材的名稱,、規(guī)格、數(shù)量,、操作要領(lǐng)和實驗注意事項等,。實驗前應(yīng)按卡片收集、清點所需用品,,一并放入超凈臺內(nèi),這樣可避免操作時因物品不全而往返拿取所造成的污染:同時,,根據(jù)每個實驗的要求,,準(zhǔn)備好瓶管支架,、器械消毒盒等。實驗器材準(zhǔn)備數(shù)要大于實驗使用數(shù),,瓶蓋數(shù)要大于瓶數(shù),。這樣才能有條不紊地做實驗,也減少了忙亂操作所引起的污染,。

2)無菌室和操作室消毒

無菌室內(nèi)每周用乳酸蒸氣(或過氧乙酸)加紫外線消毒1~2次,。實驗前,將實驗器材放入超凈臺內(nèi),,打開超凈臺紫外線燈,,同時啟動超凈臺風(fēng)機(jī),40 min后消毒完畢,,關(guān)閉紫外線燈,。這樣,超凈臺內(nèi)空氣被凈化,,超凈臺面構(gòu)成相對無菌的環(huán)境,。

3)無菌操作要求

①手指不能觸及器材使用端。如觸及,,器材需更換或燒灼后再使用(如瓶口),。

②減少手與器材的接觸面,學(xué)會手指操作,。

③一切操作,,如打開或封閉瓶口,安裝吸管,、注射器等,,都要在火焰前方進(jìn)行。瓶口,、吸管,、注射器使用前要經(jīng)過火焰消毒后使用。

④瓶口順風(fēng)斜放在支架上,。試劑用后立即封閉瓶口,。瓶口長時間敞開會增加落菌的機(jī)會。

⑤不同的細(xì)胞同時操作時,,要專管,,并要勤換吸管,防止擴(kuò)大污染和交叉污染,。

⑥瓶口液滴不能倒回瓶內(nèi),。液滴用干酒精棉球擦拭,瓶口再經(jīng)火焰消毒,。

⑦操作者動作要準(zhǔn)確敏捷,,盡量避免空氣流動,。
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4)實驗中操作要求

洗手、著裝與外科臨床要求相同,。雙手用肥皂洗凈后浸泡于消毒液中,,并用75%的酒精擦拭。細(xì)胞培養(yǎng)用液從冰箱取出,,試劑瓶口和外壁經(jīng)酒精紗布擦洗后入超凈臺,。超凈臺面要用酒精紗布擦拭。超凈臺上的物品面布局合理,,污物廢液缸,、酒精棉球缸在右側(cè)位,酒精燈在中央位,,試劑瓶在左側(cè)位,。拆除大包裝,點燃酒精燈(95%酒精),?;鹧鏌o色或微黃色表示酒精雜質(zhì)少,酒精燃燒*(不能使用廢酒精或工業(yè)酒精,,這類酒精燃燒時產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)易附著到吸管或其他瓶,、皿上,帶入培養(yǎng)液中會傷害細(xì)胞),。浸泡,。75%酒精中的金屬器械用臺面消毒鑷子取出,經(jīng)無菌干紗布擦拭后,,迅速通過火焰(器械不能在火焰中灼燒過長時間),,冷卻后使用,避免燙傷細(xì)胞,。細(xì)胞培養(yǎng)液,、牛血清、酶液的吸管,,使用后不能再用火焰消毒,,因為吸管中殘留的培養(yǎng)液被燒焦碳化,再使用時,,會把有害碳化物帶人培養(yǎng)液中毒害細(xì)胞,。操作中手指被污染時,可用酒精紗布或棉球擦拭,。在實驗過程中,,不要面向操作臺講話或咳嗽,避免將唾沫中微生物帶入超凈臺內(nèi),污染空氣,。實驗者離開超凈臺時,,立即用肘關(guān)節(jié)關(guān)閉側(cè)窗口.避免無菌室內(nèi)細(xì)菌隨空氣流人凈化操作區(qū)。elisa試劑盒

5)實驗后要求

實驗完畢,,關(guān)閉超凈臺風(fēng)機(jī)和電源,未使用過的器材放入飯盒內(nèi),,用過的玻璃器材投入清水中浸泡,,包裝紙疊卷,繩成束分類歸入,,zui后,,超凈臺面用酒精紗布或棉球擦拭,紫外線消毒,。

6)注意事項

無菌操作離不開火和酒精,,操作中避免事故發(fā)生。要用打火機(jī)點火,?;鸩顸c火時,火星德滅后投入廢缸內(nèi)(缸內(nèi)有廢酒精棉球),。酒精濺出臺面或瓶外壁時,,立即擦干;一旦發(fā)生著火事故,,立即關(guān)閉超凈臺風(fēng)機(jī),,用飯盒、濕布撲滅火焰,。 

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