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動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的基本要求

①清洗玻璃制品時(shí),，浸酸之后一定要用自來水沖洗10～15次。因?yàn)闅埓娴南匆簩?xì)胞黏附有很大影響,。清洗塑料制品時(shí)要用棉花或柔軟紗布擦洗,。千萬不要用硬毛刷，否則損害塑料表面后細(xì)胞不易貼壁,。加樣器頭(Tip)和離心管(Tube)一定要用超聲清洗處理后逐個(gè)清洗．如沒有洗凈會(huì)影響下一次使用的效果,。elisa試劑盒

②干熱滅菌時(shí)，應(yīng)在白天使用烤箱,，并不斷觀察，以免發(fā)生意外,。當(dāng)溫度超過100℃時(shí),，不能玎開烤箱門。器皿烤完后,，待溫度降至100℃之下才能開烤箱門,。金屬器械、橡膠和塑料制品不能使用干熱滅菌方法,。

③重高壓滅菌后器皿務(wù)必晾干或烘干,，以防包裝紙潮濕發(fā)霉：

④牛血清、大部分培養(yǎng)基,、胰酶和一些生物制劑(如TdR,，秋水仙素，谷氨酰胺,，異硫氰酸胍,，MOPS等)是有機(jī)溶液，均不能高壓,。

⑤濾過除菌時(shí),，濾器在使用前先裝好濾膜(有時(shí)可在上面加一層定性濾紙)，包好,，經(jīng)高壓滅菌后才能使用,。濾過酶類制劑時(shí)應(yīng)待濾器溫度降至室溫后再進(jìn)行。過濾時(shí)壓力不宜過大,，壓力數(shù)字以2為宜,。壓力太大時(shí)微孔濾膜可能破裂,，或使某些微生物變形而通過濾膜。裝濾膜時(shí)位置要準(zhǔn)確,。另外濾器包裝時(shí),，螺釘不要擰得太緊，以防高壓蒸汽不能進(jìn)入,，待高壓滅菌之后,，再擰緊使用。

⑥使用化學(xué)消毒法時(shí),，配制,。75％，酒精應(yīng)用衛(wèi)生級,，不要用化學(xué)純,、分析純和純酒精。來蘇兒水不能用于皮膚消毒,，它對皮膚有刺激性,。空氣消毒時(shí),，所有的物品要事先準(zhǔn)備齊全并使消毒者有較方便的退出途徑,。因?yàn)榧兹┗蛉樗峒訜岷蠓懦龅恼魵鈱θ说慕悄ず秃粑郎掀び袊?yán)重的刺激和傷害作用。

1)實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

實(shí)驗(yàn)前必須分門別類地制訂操作卡片,，如清洗卡,、消毒卡、細(xì)胞常用液(細(xì)胞培養(yǎng)液,、BSS液,、消化液)配制卡、牛血清檢測分裝卡,、細(xì)胞原代和傳代操作卡等：各卡片上注明實(shí)驗(yàn)所需器材的名稱,、規(guī)格、數(shù)量,、操作要領(lǐng)和實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)等,。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)按卡片收集、清點(diǎn)所需用品,，一并放入超凈臺(tái)內(nèi),，這樣可避免操作時(shí)因物品不全而往返拿取所造成的污染：同時(shí)，根據(jù)每個(gè)實(shí)驗(yàn)的要求,，準(zhǔn)備好瓶管支架,、器械消毒盒等。實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備數(shù)要大于實(shí)驗(yàn)使用數(shù),，瓶蓋數(shù)要大于瓶數(shù),。這樣才能有條不紊地做實(shí)驗(yàn),，也減少了忙亂操作所引起的污染。

2)無菌室和操作室消毒

無菌室內(nèi)每周用乳酸蒸氣(或過氧乙酸)加紫外線消毒1～2次,。實(shí)驗(yàn)前,，將實(shí)驗(yàn)器材放入超凈臺(tái)內(nèi)，打開超凈臺(tái)紫外線燈,，同時(shí)啟動(dòng)超凈臺(tái)風(fēng)機(jī),，40 min后消毒完畢，關(guān)閉紫外線燈,。這樣,，超凈臺(tái)內(nèi)空氣被凈化，超凈臺(tái)面構(gòu)成相對無菌的環(huán)境,。

3)無菌操作要求

①手指不能觸及器材使用端,。如觸及，器材需更換或燒灼后再使用(如瓶口),。

②減少手與器材的接觸面,，學(xué)會(huì)手指操作。

③一切操作,，如打開或封閉瓶口,，安裝吸管、注射器等,，都要在火焰前方進(jìn)行。瓶口,、吸管,、注射器使用前要經(jīng)過火焰消毒后使用。

④瓶口順風(fēng)斜放在支架上,。試劑用后立即封閉瓶口,。瓶口長時(shí)間敞開會(huì)增加落菌的機(jī)會(huì)。

⑤不同的細(xì)胞同時(shí)操作時(shí),，要專管,，并要勤換吸管，防止擴(kuò)大污染和交叉污染,。

⑥瓶口液滴不能倒回瓶內(nèi),。液滴用干酒精棉球擦拭，瓶口再經(jīng)火焰消毒,。

⑦操作者動(dòng)作要準(zhǔn)確敏捷,，盡量避免空氣流動(dòng)。
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4)實(shí)驗(yàn)中操作要求

洗手,、著裝與外科臨床要求相同,。雙手用肥皂洗凈后浸泡于消毒液中,，并用75％的酒精擦拭。細(xì)胞培養(yǎng)用液從冰箱取出,，試劑瓶口和外壁經(jīng)酒精紗布擦洗后入超凈臺(tái),。超凈臺(tái)面要用酒精紗布擦拭。超凈臺(tái)上的物品面布局合理,，污物廢液缸,、酒精棉球缸在右側(cè)位，酒精燈在中央位,，試劑瓶在左側(cè)位,。拆除大包裝，點(diǎn)燃酒精燈(95％酒精),?；鹧鏌o色或微黃色表示酒精雜質(zhì)少，酒精燃燒*(不能使用廢酒精或工業(yè)酒精,，這類酒精燃燒時(shí)產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)易附著到吸管或其他瓶,、皿上，帶入培養(yǎng)液中會(huì)傷害細(xì)胞),。浸泡,。75％酒精中的金屬器械用臺(tái)面消毒鑷子取出，經(jīng)無菌干紗布擦拭后,，迅速通過火焰(器械不能在火焰中灼燒過長時(shí)間),，冷卻后使用，避免燙傷細(xì)胞,。細(xì)胞培養(yǎng)液,、牛血清、酶液的吸管,，使用后不能再用火焰消毒,，因?yàn)槲苤袣埩舻呐囵B(yǎng)液被燒焦碳化，再使用時(shí),，會(huì)把有害碳化物帶人培養(yǎng)液中毒害細(xì)胞,。操作中手指被污染時(shí)，可用酒精紗布或棉球擦拭,。在實(shí)驗(yàn)過程中,，不要面向操作臺(tái)講話或咳嗽，避免將唾沫中微生物帶入超凈臺(tái)內(nèi),，污染空氣,。實(shí)驗(yàn)者離開超凈臺(tái)時(shí)，立即用肘關(guān)節(jié)關(guān)閉側(cè)窗口．避免無菌室內(nèi)細(xì)菌隨空氣流人凈化操作區(qū),。elisa試劑盒

5)實(shí)驗(yàn)后要求

實(shí)驗(yàn)完畢,，關(guān)閉超凈臺(tái)風(fēng)機(jī)和電源,，未使用過的器材放入飯盒內(nèi)，用過的玻璃器材投入清水中浸泡,，包裝紙疊卷,，繩成束分類歸入，zui后,，超凈臺(tái)面用酒精紗布或棉球擦拭,，紫外線消毒。

6)注意事項(xiàng)

無菌操作離不開火和酒精,，操作中避免事故發(fā)生,。要用打火機(jī)點(diǎn)火?；鸩顸c(diǎn)火時(shí),，火星德滅后投入廢缸內(nèi)(缸內(nèi)有廢酒精棉球)。酒精濺出臺(tái)面或瓶外壁時(shí),，立即擦干,；一旦發(fā)生著火事故，立即關(guān)閉超凈臺(tái)風(fēng)機(jī),，用飯盒,、濕布撲滅火焰。