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技術(shù)文章

如何掌握ELISA檢測(cè)系統(tǒng)的關(guān)鍵要素

閱讀:108          發(fā)布時(shí)間:2016-1-1

在ELISA檢測(cè)系統(tǒng)的關(guān)鍵要素中,,包被原的性質(zhì)很重要,,蛋白濃度,是否降解,,這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識(shí)別,,所以保留抗原很重要,做重組蛋白時(shí),,一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理,。封鎖就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑,從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附,。但有時(shí)因?yàn)樵囼?yàn)的需要,,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。

    elisa試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),。該法適于測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清,、血清、血漿及組織液中的樣本,,干擾小可以測(cè)到每毫升納克水平的細(xì)胞因子(或受體)的水平,。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑:①固相的抗原或抗體,;②酶標(biāo)記的抗原或抗體;③酶作用的底物,。
    根據(jù)ELISA試劑盒試劑的來源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的具備條件,,可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。
(1) 雙抗體夾心法,;
(2) 雙位點(diǎn)一步法,;
(3) 間接法測(cè)抗體;
(4) 競(jìng)爭(zhēng)法,;
(5) 捕獲法測(cè)IgM抗體,;
(6) 應(yīng)用親和素和生物素。
elisa試劑盒普遍用作非放射性同位素的成鍵化驗(yàn),。在這種方法中,,通常標(biāo)準(zhǔn)配體是固定的,通過加入溶液相受體或蛋白質(zhì)來使之成鍵,。通過加入與受體特異性反應(yīng)的抗體來定量成鍵的受體,,而且zui初抗體的量以加入第二種能顯色的抗體測(cè)量。第二種抗體能識(shí)別抗體的末端,,在其末端的堿性磷酸酯或過氧化物酶等與酶發(fā)生反應(yīng),,從而使溶液顯色。

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