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常用上皮組織及腫瘤標(biāo)記物
閱讀:1973 發(fā)布時(shí)間:2015-10-28角蛋白(Keratin)
elisa試劑盒角蛋白分為表皮角蛋白和細(xì)胞角蛋白兩種,這是根據(jù)其分部的部位而分的,。表皮角蛋白包括皮膚表皮,,消化道粘膜上皮、腺上皮甲狀腺濾泡上皮,、氣管,、支氣管上皮、肺泡上皮,,角膜上皮,、前列腺上皮等。細(xì)胞角蛋白包括頜下腺,,胰腺,,胸腺,細(xì)胞,,肝細(xì)胞,,腎小管細(xì)胞等,。目前,,應(yīng)用上述細(xì)胞中間絲角蛋白作為抗原所制備的抗體有單克隆抗體和多克隆抗體。角蛋白可有19個(gè)亞型 ,,分為堿性和酸性,,從1-8為堿性,9-19為酸性,,分子量40-68不等,,復(fù)層鱗上皮多為高分子量,單層上皮則多為低分子量,,了解這些在臨床的鑒別診斷及抗體的應(yīng)用中都 有極大的幫助,。目前,,檢測(cè)這類特質(zhì)的抗體很多,根據(jù)不同的克隆出不周類型的抗體,。常用的抗體有:
①單克隆小鼠抗人細(xì)胞角蛋白(Monoclonal mouse anti human cytokeratin)克隆為MNF116,。
該抗體應(yīng)用范圍,各類的冰凍切片,,涂片,,細(xì)胞培養(yǎng)片和經(jīng)甲醛固定石蠟包埋的組織切片 。用本抗體檢測(cè)的陽(yáng)性組織有:鱗狀上皮,,甲狀腺濾泡上皮消化道上皮,,胰腺膽管上皮,肝膽管上皮,,角膜上皮等以及發(fā)生于上述來(lái)源的腫瘤,。應(yīng)該注意的是有一些腫瘤在檢測(cè)時(shí),可出現(xiàn)兩種陽(yáng)性物,,即用兩種抗體來(lái)檢測(cè)如采用CK和Vimentin,,可出現(xiàn)雙向表達(dá)陽(yáng)性的腫瘤有:癌內(nèi)瘤,子宮內(nèi)膜腺癌肺腺癌,,上皮樣內(nèi)瘤,,滑膜內(nèi)瘤,唾液腺肌上皮瘤,,間皮瘤等等,。這是由于在這些腫瘤中存在著兩種不同的中間絲的緣故。
應(yīng)用該抗體檢測(cè)呈陰性的腫瘤有:各種淋巴瘤,,各類肌源性的腫瘤,,惡性黑色素瘤,骨腫瘤,,纖維組織腫瘤,,脂肪腫瘤,神經(jīng)組織腫瘤和精原細(xì)胞瘤等,。
在檢測(cè)某些腫瘤時(shí),,常可出現(xiàn)這樣的問(wèn)題,,在同一張切片上,,同樣的鱗狀細(xì)胞癌的細(xì)胞,有的抗原表達(dá)為強(qiáng)陽(yáng)性,,有的表達(dá)為中度陽(yáng)性性,,有的表達(dá)為弱陽(yáng)性,甚至有的呈陰性,。這主要是由于各種細(xì)胞處于增生的不同階段,,細(xì)胞分泌的抗原量不同,,因而表達(dá) 也不同。
該抗體可用各種方法檢測(cè),,但用真空負(fù)壓LSAB法,。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)注明該抗體稀釋度1:50至1:100,我們使用為1:100,。
②單克隆小鼠抗人細(xì)胞角蛋白,,克隆為L(zhǎng)P34。該抗體的使用范圍,,檢測(cè)各種組織基本上與①號(hào)抗體相同,,但效果不如①號(hào)。
③單克隆小鼠抗 人細(xì)胞角蛋白,,克隆為35BH11,。該抗體的特點(diǎn)是:A,可檢測(cè)幾乎所有的非鱗狀上皮包括卵巢腺癌,,胃腸道腺癌,,甲狀腺癌,肝癌,, 子宮癌,,腎癌等。B,、不與鱗狀上皮起反應(yīng),。C、對(duì)膀胱癌,,鼻咽癌,,胸腺癌等部分陽(yáng)性。但是,,該 抗體只能用于冰凍切片 ,,涂片和細(xì)胞培養(yǎng)片。不能用于石蠟切片 ,。
elisa試劑盒④單克隆小鼠抗 人細(xì)胞角蛋白,,克隆34BE12。該 抗體屬于高分子量類型,,它可檢測(cè)鱗狀上皮管上皮和 復(fù)層上皮的組織及其來(lái)源的腫瘤,。
適用范圍:可用于各種類型的切片 ,。
2. 單克隆小鼠抗人上皮細(xì)胞膜抗原 (Monoclonal mose anti human epithelial memberance antigen,EMA)
上皮細(xì)胞膜抗原是上皮細(xì)胞表面大分子糖蛋白物質(zhì),,它不僅存在于各種上皮,以及各種上皮來(lái)源的腫瘤,,也可存在于部分非上皮及其來(lái)源的腫瘤,,如漿細(xì)胞,,組織細(xì)胞等。
應(yīng)用EMA來(lái)檢測(cè)正常的組織時(shí),,其陽(yáng)性表達(dá)主要在細(xì)胞膜上,,但在檢測(cè)腫瘤時(shí),這種陽(yáng)性物不僅在細(xì)胞膜上出現(xiàn),,也可在細(xì)胞漿中見(jiàn)到,。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞在分化增生時(shí),,陽(yáng)性物表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性,。當(dāng)腫瘤細(xì)胞趨于成熟或已成熟時(shí),陽(yáng)性物表達(dá)較弱,,腫瘤細(xì)胞未分化時(shí),,抗原表達(dá)呈陰性。
EMA在檢測(cè)上皮組織及其來(lái)源的腫瘤組織時(shí),,抗原表達(dá)陽(yáng)性,,在檢測(cè)非上皮來(lái)源的腫瘤如漿細(xì)胞瘤,滑膜內(nèi)瘤,,上皮樣內(nèi)瘤,,平滑肌內(nèi)瘤,神經(jīng)鞘瘤,,及來(lái)惡性神經(jīng)鞘瘤時(shí),,抗原也可表達(dá)為部分陽(yáng)性。因此認(rèn)為:EMA不是上皮性來(lái)源腫瘤所*的標(biāo)記物,,它的特異性不高,。
該 抗體適用范圍廣,適合于各種類型的切片,,應(yīng)用真空負(fù)壓LSAB法檢測(cè)時(shí),,稀釋度在1:100。
3. 癌胚抗原(Carcinombryonic antigen ,CEA)
自1965年Go等從結(jié)腸癌分離出一種腫瘤的相關(guān)抗原后,,經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的研究后發(fā)現(xiàn),,它存在于胎兒的腸里,由于人們將其稱為癌胚抗原,。在實(shí)際應(yīng)用中,,CEA是一種廣譜的標(biāo)記物。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明,,它對(duì)胃癌,,腸癌,肺癌,乳腺癌,,胰腺癌,,子宮頸癌,子宮體腺癌,,卵巢癌,,皮膚鱗狀細(xì)胞癌,膀胱移行上皮癌,,食道癌等,,抗原表達(dá)陽(yáng)性,在上述的同類組織及癌旁類性組織,,也可見(jiàn)到陽(yáng)性物,,有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo),用CEA標(biāo)記滑膜內(nèi)瘤,,間皮瘤,,上皮樣內(nèi)瘤和腦膜瘤,也可表達(dá)陽(yáng)性,。
目前,,CEA有兩種產(chǎn)品,一是單克隆抗體,,另一是多克隆抗體,。
① 單克隆小鼠抗 人CEA,克隆為A5B7,。
該抗體的特點(diǎn),,純度高,雜質(zhì)含量少,,很少引起非特異性染色,,同時(shí),也不與含糖蛋白的物質(zhì)起反應(yīng),,因此,,背景清晰干凈。
該抗體可檢測(cè)上述的病種及其來(lái)源的組織,,適用于各種切片的染色,。稀釋度為1:100。
② 兔抗人CEA,。該抗體為多克隆抗體,,純度不如①號(hào)抗體,檢測(cè)及適應(yīng)與①號(hào)抗體相同,,但效果不如①號(hào)抗體,,且較容易產(chǎn)生背景,。稀釋度在1:300。
4.山羊抗人甲胎蛋白(Goat anti human alphafeloprotein,AFP)
AFP主要由胎兒肝細(xì)胞和卵黃細(xì)胞產(chǎn)生的一種酸性糖蛋白少量由胎兒的胸腺,、肺、胃,、腸道的細(xì)胞產(chǎn)生,。AFP也不是一種肝癌*的標(biāo)記物。初用時(shí)把AFP作為原發(fā)性肝癌的一項(xiàng)特異性診斷指標(biāo),。隨著免疫組化的深入開(kāi)展和研究的深入進(jìn)行,,實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明:AFP的升高不僅在原發(fā)性肝細(xì)胞癌的病例,在生殖細(xì)胞腫瘤卵黃瘤和睪丸胚胎癌的病例也可大量見(jiàn)到,。
用AFP檢測(cè)后顯示陽(yáng)性的病例有:原發(fā)性肝細(xì)胞癌,,胃癌,卵黃 瘤和睪丸胚胎癌等,。其陽(yáng)性 表達(dá)部位主要在細(xì)胞漿,,也有少量在細(xì)胞膜和細(xì)胞核上。
該抗體適合于各種切片的標(biāo)記,,可用任何一種 免疫 方法來(lái)進(jìn)行染色,,稀釋度為1:100-1:300。
elisa試劑盒上述四種類型的抗體可作為來(lái)源于上皮的腫瘤及其它來(lái)源的腫瘤的區(qū)別,。只要損傷正確,,抗體的質(zhì)量沒(méi)問(wèn)題,就可獲得滿意的結(jié)果,。使用時(shí)應(yīng)根據(jù)不同的組織,,不同的形態(tài)結(jié)構(gòu),來(lái)選擇合適的抗體,。當(dāng)然有的腫瘤決不是用一兩種抗體就能夠把它們給予區(qū)分開(kāi)來(lái),。因此,要根據(jù)不同的情況合理使用抗體,,以便作出正確的診斷,。