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ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的內(nèi)源性物質(zhì)
閱讀:85 發(fā)布時(shí)間:2015-10-12elisa試劑盒 有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì),,可以不同程度影響檢測(cè)結(jié)果,。常見的干擾物質(zhì)有:類風(fēng)濕因子,、補(bǔ)體,、嗜異 性抗體、嗜靶抗原自身抗體,、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠IgG 抗體,、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
(1)類風(fēng)濕因子 人血清中IgM,、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合,,從而導(dǎo)致假陽性。
解決該情況的辦法是:①用F(ab)2替代完整的IgG,;②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效),;③檢測(cè)抗原時(shí),,可以用2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本 稀釋液中,使RF降解,。
(2)補(bǔ)體 ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中,,抗體分子發(fā)生變構(gòu),其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來,,使C1q 可以將二者連接起來,,從而造成假陽性。
elisa試劑盒解決的辦法是:①用EDTA稀釋標(biāo)本,;②用53℃,,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活,。
(3)嗜異性抗體 人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物(如鼠等)IgG 結(jié)合的天然嗜異性抗體,,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽性,。
解決的辦法是:可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動(dòng) 物IgG ,,但加入量不足或亞類不同時(shí)無效。
(4)嗜靶抗原的自身抗體 抗甲狀腺球蛋白,、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,,有時(shí)能與靶抗原結(jié)合elisa試劑盒形成復(fù)合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測(cè)定結(jié)果,。
為避免以上情況出現(xiàn),,解決的辦法是:測(cè)定前需用理化方法將其解離后再測(cè)定。
(5)醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠IgG 抗體 臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療,,用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù),,均有可能使這些病人體 內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體,;另外,被鼠等嚙齒類動(dòng)物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠IgG 抗體,。這些病人ELISA測(cè)定時(shí)均可產(chǎn)生假陽性,。
解決的辦法是:測(cè)定抗原時(shí),在標(biāo)本中加入足量的正常鼠IgG ,,從而克服由于上述原因造成的假陽性,。
(6)交叉反應(yīng)物質(zhì) 類地高辛、類AFP樣物質(zhì)等,,是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì),。在用多抗測(cè)定抗原時(shí)對(duì)測(cè)定結(jié)果影響不大,但在用單克隆抗體測(cè)定抗原時(shí) ,,如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相elisa試劑盒對(duì)應(yīng)的靶決定簇時(shí),,也會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
(7)標(biāo)本中其它成分的影響 血清脂質(zhì)過高,、膽紅素,、血紅蛋白及血液粘度過大等,均對(duì)ELISA測(cè)定結(jié)果有干擾作用,。