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ELISA試劑盒產(chǎn)生的反應(yīng)
閱讀：146 發(fā)布時(shí)間：2015-4-13DH2+H202 HRP D+2H2O
上式中DH2為供氫體（即底物），H2O2為受氫體,。HRP對(duì)受氫體的專(zhuān)一性很高,，除H2O2外,，僅作用于小分子醇和尿素的過(guò)氧化物,。HRP的底物有多種,，在ELISA試劑盒中常用的有：鄰苯二胺（orthophenylenediamine,，OPD）,，四甲基聯(lián)苯胺（3,，3，5,，5-tetramethyl-benzidine,，TMB）和2,，2,，-連氮基-雙-3-乙基苯噻唑啉磺酸鹽[2,，2，-azino-bisc（3-ethyl-benzthiazolinesulfonate-6）,，ABTS],。三者各有優(yōu)缺點(diǎn)：OPD是在ELISA中應(yīng)用zui多的底物,，靈敏度高,，比色方便,，但配成溶液后穩(wěn)定性差，且有致異變性,；TMB經(jīng)酶作用后由五色變藍(lán)色,，加酸終止反應(yīng)后顯黃色,，目測(cè)對(duì)比鮮明,，可比色定量,，溶液的穩(wěn)定性也較差，但無(wú)致異變性,，ELISA試劑盒因此應(yīng)用日見(jiàn)增多,；ABTS雖然靈敏度不如OPD和TMB,，但空白值很低。
（2）ALP：是一種磷酸酯的水解酶,，用做示蹤酶的ALP活性應(yīng)在l 000U／mg以上。ALP常用的底物為對(duì)硝基苯磷酸鹽（PNP），降解產(chǎn)物為黃色的對(duì)硝基酚,。經(jīng)NaOH終止酶反應(yīng)后,，顏色維持比較穩(wěn)定。
在ELISA中酶作用于底物后生成有色物質(zhì)、熒光物質(zhì)或?qū)е禄瘜W(xué)發(fā)光,，分別可用分光光度計(jì),、熒光光度計(jì)測(cè)量及照度計(jì)測(cè)量。熒光和化學(xué)發(fā)光測(cè)定的敏感度均高于比色測(cè)定,，ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍亦較比色反應(yīng)寬,，測(cè)定效果優(yōu)于常用的比色ELISA,。
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