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Elisa試劑盒原理
閱讀：136 發(fā)布時(shí)間：2015-3-19免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng),，所以任何的診斷試劑離不開的原料,，如抗原抗體，酶等,。以前用于免疫測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原,，而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備,。近年來,，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑,，各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn),。
ELISA試劑盒應(yīng)用定性夾心免疫檢測(cè)技術(shù)，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段,，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育,，如果其中存在HEV IgM抗體,，這些抗體就會(huì)與HEV 的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面,，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份,。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結(jié)合物,，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會(huì)與*次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合,，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶-底物反應(yīng),，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化,，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng)，并在波長: 450nm處測(cè)量O.D.值,
按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽性,。