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做ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線時需要重點注意的細(xì)節(jié)問題
閱讀:202 發(fā)布時間:2015-3-18用于免疫檢測的所謂“標(biāo)準(zhǔn)曲線"其實稱為擬合曲線比較合適,。ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線做的好與壞會直接影響到實驗的結(jié)果,,甚至是關(guān)系到實驗的成敗,。在今天的文章中,,上海撫生技術(shù)員為您總結(jié)出:做ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線時需要重點注意的細(xì)節(jié)問題,一起來看下。
1.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個比較大的跨度,,并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度,,即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi),包括上限和下限,。而對于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線,,盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度zui陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi),。
2.檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品時,,應(yīng)按濃度遞增順序進行,以減少高濃度對低濃度的影響,,提高準(zhǔn)確性,。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個點,但至少要保證有5個點,。
4.做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒炓蟛煌兴儎?,但一般來說,相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98,,對于有些實驗,,至少要0.99甚至是0.999。
5.樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出來的,,所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事,,否則后面的實驗結(jié)果無從談起。
6.采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度,,這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離,。