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1.ELISA標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

120pg/ml

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

60pg/ml

4號標準品

150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

30pg/ml

3號標準品

150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

15pg/ml

2號標準品

150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

7.5pg/ml

1號標準品

150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。  

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5,。

9.顯色：ELISA每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.測定：以空白空調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。