化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)方法大起底
閱讀：381 發(fā)布時(shí)間：2015-3-6一款合適的分離ELISA試劑盒可以說(shuō)是實(shí)驗(yàn)成功的保障,，因?yàn)橹挥蝎@得正確的ELISA試劑盒,，下游的分析結(jié)果才可能準(zhǔn)確,。目前，市面上有多種多樣的分離試劑盒可供選擇,，它們的主要區(qū)別在于分離方法和篩選標(biāo)志,。那么，如何選擇自己的細(xì)胞分離試劑盒呢,？希望本文能為你提供一些幫助,。
正向選擇VS負(fù)向選擇
試劑盒分離試劑盒的工作原理主要有兩種，正向選擇和負(fù)向選擇,。正向選擇的試劑盒直接結(jié)合的抗體來(lái)進(jìn)行捕獲,。這種抗體通常與磁珠相連，可以利用磁鐵將懸液中的抗體-磁珠-復(fù)合物提取出來(lái),，再通過(guò)二抗將磁珠與目標(biāo)分開(kāi),。負(fù)向選擇的試劑盒也采用類(lèi)似的抗體包被磁珠，不過(guò)這種試劑盒是通過(guò)去除樣品中的非目的,，來(lái)間接捕獲目的,。
這兩種細(xì)胞分離試劑盒如何取舍，主要取決于目標(biāo)細(xì)胞的表面是否具有特異性強(qiáng)的篩選標(biāo)志。這樣的篩選標(biāo)志能夠?qū)崿F(xiàn)特異性的捕獲,，避免所獲得的細(xì)胞被非目標(biāo)細(xì)胞污染,。如果你的目標(biāo)細(xì)胞剛好具有這樣的篩選標(biāo)志，那么正向選擇的ELISA細(xì)胞分離試劑盒就是*選擇,。但如果目標(biāo)細(xì)胞并不具有特異性強(qiáng)的篩選標(biāo)志,，那我們還是選用負(fù)向選擇的細(xì)胞分離試劑盒。
篩選標(biāo)志的確定
通過(guò)PubMed等數(shù)據(jù)庫(kù)中的文獻(xiàn),，我們一般可以確定在目標(biāo)上表達(dá)的篩選標(biāo)志,。如果文獻(xiàn)中找不到適合自己的表面標(biāo)志，我們還可以用目標(biāo)的DNA序列進(jìn)行BLAST搜索,。BLAST搜索結(jié)果會(huì)顯示,，目標(biāo)細(xì)胞上可能表達(dá)的表面標(biāo)志，在此基礎(chǔ)上可以選取用于捕獲的細(xì)胞表面蛋白,。舉例來(lái)說(shuō),，對(duì)一個(gè)T進(jìn)行BLAST搜索,，結(jié)果會(huì)顯示該是否表達(dá)CD4或CD8,。在得知目標(biāo)表達(dá)CD4之后，我們可以先對(duì)樣品進(jìn)行一個(gè)免疫實(shí)驗(yàn)（如ELISA）,，以檢驗(yàn)BLAST搜索的結(jié)果,。一旦證實(shí)目標(biāo)的確表達(dá)CD4,，我們就可以用相應(yīng)試劑盒來(lái)篩選CD4陽(yáng)性的T細(xì)胞。