化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
ELISAZ適比例和特異性
閱讀：154 發(fā)布時(shí)間：2015-1-29ELISA在恒定量的抗體中加入遞增量的抗原形成抗體復(fù)合物（沉淀）的量見(jiàn)圖1-4,。曲線(xiàn)的高峰部分是抗原抗體比例zui合適的范圍，稱(chēng)為等價(jià)帶（zone ofequivalence）,。在等價(jià)帶前后分別為抗體過(guò)剩帶和抗原過(guò)剩帶,。如果抗原或抗體極度過(guò)剩，則無(wú)沉淀物形成,，在免疫測(cè)定中稱(chēng)為帶現(xiàn)象（zone phenomenon）,。抗體過(guò)量稱(chēng)為前帶（prezone），抗原地過(guò)量稱(chēng)為后帶（postzone）,。在用免疫學(xué)方法測(cè)定抗原時(shí),，應(yīng)使反應(yīng)系統(tǒng)中有足夠的抗體量，否則測(cè)得的量會(huì)小于實(shí)際含量,，甚至出現(xiàn)假陰性,。
特異性
抗原抗體的結(jié)合實(shí)質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間。由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系,，所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性,。例如乙肝病毒中的表面抗原（ HBsAg）、e抗原（HBeAg）和核心抗體（HBcAg）,，隨來(lái)源于同一病毒,，但僅與其相應(yīng)的抗體結(jié)合，而不與另外兩種抗體反應(yīng),?？乖贵w反應(yīng)的這種特異性使免疫測(cè)定能在一非常復(fù)雜的蛋白質(zhì)化合物（例如血清）中測(cè)定某一特定的物質(zhì)，而不需先分離待檢物,。
但是這種特異性也不是的,。假使兩種化合物有著部分相同的結(jié)構(gòu)，在抗原抗體反應(yīng)中可出現(xiàn)交叉反應(yīng),。例如：絨毛膜促性腺激素（hCG）和黃體生成激素（LH）均由α和β兩個(gè)亞單位組成,，其結(jié)構(gòu)的不同處在β亞單位，而兩者的α亞單位是同類(lèi)的,。用hCG免疫動(dòng)物所得的抗血清中含有抗α-hCG和抗β-hCG兩種抗體,，抗α-hCG抗體將與LH中的
α酶位發(fā)生交叉反應(yīng)。在臨床檢驗(yàn)中,，如用抗hCG抗血清作為妊娠診斷試劑檢定尿液中hCG,，只能用于hCG濃度較高的試驗(yàn)，否則婦女生理性排泄入尿液中的微量LH將與之發(fā)生交叉反應(yīng),。因此在作為早孕診斷（敏感度應(yīng)達(dá)到50mIu/mlhCG）的實(shí)際中必須應(yīng)用只對(duì)hCG特異的抗β-hCG,，以避免與其它激素的交叉反應(yīng)的發(fā)生。