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制備骨髓細胞染色體的介紹
閱讀:170 發(fā)布時間:2014-9-22一,、原理
骨髓染色體標本制備通常用于白血病患者,特別是慢性或急性粒細胞性白血病,,因為骨髓反映粒系統(tǒng)細胞增生情況,,這些病人不宜用外周血。即
使是淋巴細胞性白血病,,也不主張用外周血,,因為加PHA刺激外周血培養(yǎng),,只能獲得正常淋巴細胞分裂相,,并不能反映那些病理淋巴細胞的染色體
改變。(EILSA試劑盒的相關信息)
骨髓細胞屬不斷增殖的細胞,,培養(yǎng)可分短期培養(yǎng)和直接制片法,,無論哪種其培養(yǎng)液中均不需加PHA。
二,、用品和試劑
同外周血染色體制備,。
三、操作步驟
(一)短期培養(yǎng)法
1.取材,、培養(yǎng):從髂骨取骨髓液0.2—0.5ml,,無菌注入裝有5ml培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中,37℃培養(yǎng)23—25小時后,,加入秋水仙堿(終濃度為0.07μg/
ml),,繼續(xù)培養(yǎng)3—4小時,收獲,。
2.染色體制片:低滲,、固定、制片及染色同實驗一,。
(二)直接制備法
1.從髂骨抽取0.3—0.5ml,,立即注入濃度為0.07μg/ml的秋水仙堿的生理鹽水5ml中,以吸管輕輕吸動,,將骨髓中脂肪顆粒充分吸掉,,1000rpm
離心8分鐘,棄上清,。
2.加入同樣濃度的秋水仙堿生理鹽水2—3ml,,室溫放置2—3小時,離心棄上清,。
3.染色體制片:低滲,、固定、制片及染色同外周血染色體制備,。