化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
免疫酶技術(shù)有哪些優(yōu)勢(shì)
閱讀：172 發(fā)布時(shí)間：2014-9-3免疫酶技術(shù)有哪些優(yōu)勢(shì),？
免疫酶技術(shù)就是用酶(如辣根過(guò)氧化物酶)標(biāo)記已知抗體(或抗原),，然后與組織標(biāo)本在一定條件下反應(yīng),，如果組織中含有相應(yīng)抗原(或抗體)，抗原抗體相互結(jié)合形成的復(fù)合物中所帶酶分子遇到底物時(shí),，能催化底物水解,、氧化或還原，產(chǎn)生顯色反應(yīng),，這樣就可以識(shí)別出標(biāo)本抗原(抗體)分布的位置和性質(zhì),，通過(guò)圖像分析并可達(dá)到定量的目的。
免疫酶技術(shù)有哪些優(yōu)勢(shì),？
免疫熒光技術(shù)雖已廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)的研究與診斷,，但是熒光抗體染色標(biāo)本不能長(zhǎng)期保存，對(duì)組織細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu)分辨不清,，免疫酶技術(shù)則能克服上述不足,，標(biāo)記免疫酶技術(shù)的敏感性更優(yōu)于免疫熒光法，對(duì)石蠟切片標(biāo)本尤為適用,，為免疫病理研究開(kāi)辟了一條新途徑,，酶顯色產(chǎn)物具有較高的電子密度，經(jīng)過(guò)適當(dāng)處理還可以進(jìn)行免疫電鏡觀察,，免疫酶組化技術(shù)分為酶標(biāo)記法與非標(biāo)記抗體技術(shù),，前者是將酶通過(guò)交聯(lián)劑結(jié)合在抗體分子上，形成酶標(biāo)記抗體,。后者是將酶作為抗原與相應(yīng)的特異性抗體連接進(jìn)行的免疫反應(yīng),，稱為非標(biāo)記抗體酶技術(shù)。
免疫酶技術(shù)利用酶催化底物反應(yīng)的生物放大作用,，提高特異性抗原-抗體免疫學(xué)反應(yīng)檢測(cè)敏感性的一種標(biāo)記免疫技術(shù),。該技術(shù)所用的酶要求純度高,、催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高、專一性強(qiáng),、性質(zhì)穩(wěn)定,、來(lái)源豐富、價(jià)格不貴,、制備成的酶標(biāo)抗體或抗原性質(zhì)穩(wěn)定,，繼續(xù)保留著它的活性部分和催化能力。在受檢標(biāo)本中不存在與標(biāo)記酶相同的酶,。另外它的相應(yīng)底物應(yīng)易于制備和保存,，價(jià)格低廉，有色產(chǎn)物易于測(cè)定,，光吸收高,。
免疫酶技術(shù)有哪些優(yōu)勢(shì)？
免疫酶技術(shù)的主要試劑為固相的抗原或抗體,、酶標(biāo)記的抗原或抗體和與標(biāo)記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應(yīng)底物,。可作固相載體的物質(zhì)很多,，zui常用的是聚苯乙烯,。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來(lái)的免疫活性,。聚苯乙烯為塑料,，可制成各種形式，在測(cè)定過(guò)程中,，它作為載體和容器,，不參與化學(xué)反應(yīng)，加之它的價(jià)格低廉,，所以被普遍采用,。
良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好，空白值低,，孔底透明度高,，各板之間和同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于配料的不同和制作工藝的差別,，各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大,。因此每一批號(hào)的聚苯乙烯制品在使用前須檢查其性能。常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG（一般為10ng／ml）包被ELISA板各孔后,，每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋的酶標(biāo)抗人IgG抗體,，保溫后洗滌，加底物顯色,，終止酶反應(yīng)后分別測(cè)每孔溶液的吸光度,?？刂品磻?yīng)條件，使各讀數(shù)在0.8左右,。計(jì)算所有讀數(shù)的平均值。所有單個(gè)讀數(shù)與平均讀數(shù)之差應(yīng)小于10%.與聚苯乙烯類(lèi)似的塑料為聚氯乙烯,。作為ELISA固相載體,，聚氯乙烯板的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄，可切割,，價(jià)廉,、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高,，但空白值有時(shí)也略高,。
為比較不同固相在某一ELISA測(cè)定中的優(yōu)劣，可用以下方法加以檢驗(yàn)：用其他免疫學(xué)測(cè)定方法選出一個(gè)典型的陽(yáng)性標(biāo)本和一個(gè)典型的陰性標(biāo)本,。將它們分別進(jìn)行一系列稀釋后,，在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操作步驟進(jìn)行測(cè)定，然后比較測(cè)定結(jié)果,。在哪一種載體上陽(yáng)性結(jié)果與陰性結(jié)果判別zui大,，這種載體就是這一ELISA測(cè)定的zui合適的固相載體。