化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
ELISA試劑盒使間接法的試劑本底加深
閱讀：210 發(fā)布時(shí)間：2014-7-30 ELISA試劑盒抗凝不*的標(biāo)本因纖維蛋白原的干擾而造成假陽性,，建議盡量不用抗凝血尤其是肝素抗凝劑。
1.血清標(biāo)本如是以無菌操作分離,，則可以在2～8℃下保存一周,，如為有菌操作，則建議冰凍保存,。樣本的長時(shí)間保存,，應(yīng)在-70℃以下。
2.在使用微量加樣器時(shí),，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭,，即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3.吸取液體時(shí)速度不易太快,，以免產(chǎn)生氣泡,，吸取的量不夠準(zhǔn)確。
4.樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,，一則細(xì)菌的生長,，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶,，如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾,。1．5 吸取液體時(shí)要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差,。
5.液體全部加入酶標(biāo)孔后,，將酶標(biāo)板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充分混合均勻,，也使其得到充分的反應(yīng),。
6.孵育時(shí)要使蓋板膜封好酶標(biāo)板，防止水分蒸發(fā),，以防曲線不成線性,。
7.實(shí)驗(yàn)前30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出，使試劑盒中的所有ELISA試劑盒與提取好的樣品溶液的溫度相同,，酶標(biāo)板只要取出所需量,。
8.由于底物顯色劑對光及其敏感,，因此要避光保存。
要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血,。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),，其有類似過氧化物的活性，因此,，在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA試劑盒測定中,，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色
9.手工洗板時(shí)每次加入洗滌液后,。應(yīng)靜置15～30s，不要將一個(gè)酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中,，防止交叉污染,。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。
10.檢測吸光度前應(yīng)將酶標(biāo)儀打開,，將其預(yù)熱30min以上,。
11.底物為TMB，避免與皮膚相接觸,。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性,，應(yīng)盡量避免接觸皮膚。
12.孵育的時(shí)間應(yīng)該嚴(yán)格按照試劑盒說明書上的時(shí)間為準(zhǔn),。
13.要盡量做雙孔實(shí)驗(yàn),，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，又能反映出試劑盒的精密度,。
14.冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融,。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果,。此外,，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)行劇烈振蕩,，反復(fù)顛倒混勻即可,。
15.對樣本的結(jié)果有疑問時(shí)需要使用其他檢測方法進(jìn)行驗(yàn)證。
16.沒有去離子水或雙蒸水時(shí),，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液,，切勿使用自來水。
17.標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí),，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測,。標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過長導(dǎo)致血清IgG 聚合。超過一周測定的需－20℃保存。凍結(jié)血清融解后,，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均,，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡,。混濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,，澄清后再檢測,。