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特定ELISA試劑盒的檢測目的
閱讀：205 發(fā)布時間：2014-7-29目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制,，因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì) 量,。此外,，當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時,，則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前臨時配制,。 將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時，孔內(nèi)溫度從室溫 升至37℃,，需要一定的時間,，尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下,，這段升溫時間可能還比較長，ELISA試劑盒而在臨床實驗室中,，很少有人注意這個問題,，通常是將微孔 板一放入溫箱即開始計時，這樣就很容易造成實際測定中溫育時間不夠,，弱陽性樣本測不出來的問題,。
一、臨床標(biāo)本的收集和保存
用于ELISA試劑盒測定的臨床標(biāo)本zui為常用的是血清（漿）,，也用到唾液,、腦脊液、尿液,、糞便等標(biāo)本,。目前臨床上使用血清標(biāo)本測定的標(biāo)志物一般有傳染性 病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物,、激素,、特種蛋白、細胞因子和治療藥物等,。對用于激素和治療藥物測定的血清標(biāo)本的收集,，要注意收集時間甚或體位有可能會對 測定結(jié)果產(chǎn)生影響。如可的松在早晨4～6點之間,，會有一峰值出現(xiàn)：生長激素,、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發(fā)性方式釋放，因此,，在ELISA試劑盒測定此類激素時,，有必要在密切相連的時間間隔內(nèi)采取數(shù)份血樣本，以其中間值為測定值,。又如當(dāng)從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r,，血清中腎素活性將出現(xiàn)明顯增高。再如治療藥物 的檢測,，應(yīng)根據(jù)藥代動力學(xué)選擇服藥后的zui適時間抽血檢測,。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢測的血清標(biāo)本的收集則沒有時間和體位 方面的影響,，只是在處理和保存方面要考慮以下幾個方面：
（1）要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血,。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性,，因此,，在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA試劑盒測定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色,。
（2）樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染，一則細菌的生長,，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用,；二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標(biāo)記的ELISA試劑盒測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
（3）血清標(biāo)本如是以無菌操作分離,，則可以在2～8℃下保存一周,，如為有菌操作,，則建議冰凍保存,。樣本的長時間保存，應(yīng)在-70℃以下,。
（4）冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融,。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果,。此外,，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進行劇烈振蕩,，反復(fù)顛倒混勻即可,。
曾有一地處南方的血站同行提出了一個問題，就是在每一年的 冬季總有那么一個多月的時間,，在做HBsAg測定的室內(nèi)質(zhì)控中,，ELISA試劑盒測定由衛(wèi)生部臨床檢驗中心供應(yīng)的1 ng/ml弱陽性樣本時，總是測不出來,，不知原因為 何,？這可能就與南方冬天室內(nèi)溫度較低有關(guān)，此時微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37℃溫育時間不夠,，以致弱陽性樣本測定為陰性,。