化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
特定ELISA試劑盒的檢測(cè)目的
閱讀：222 發(fā)布時(shí)間：2014-7-29目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)對(duì)所提供的濃縮液稀釋配制,，因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì) 量,。此外,，當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時(shí),，則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前臨時(shí)配制,。 將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時(shí)，孔內(nèi)溫度從室溫 升至37℃,，需要一定的時(shí)間,，尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下，這段升溫時(shí)間可能還比較長(zhǎng),，ELISA試劑盒而在臨床實(shí)驗(yàn)室中,，很少有人注意這個(gè)問(wèn)題，通常是將微孔 板一放入溫箱即開(kāi)始計(jì)時(shí),，這樣就很容易造成實(shí)際測(cè)定中溫育時(shí)間不夠,，弱陽(yáng)性樣本測(cè)不出來(lái)的問(wèn)題。
一,、臨床標(biāo)本的收集和保存
用于ELISA試劑盒測(cè)定的臨床標(biāo)本zui為常用的是血清（漿）,，也用到唾液、腦脊液,、尿液,、糞便等標(biāo)本。目前臨床上使用血清標(biāo)本測(cè)定的標(biāo)志物一般有傳染性 病原體的抗原和抗體,、腫瘤標(biāo)志物,、激素、特種蛋白,、細(xì)胞因子和治療藥物等,。對(duì)用于激素和治療藥物測(cè)定的血清標(biāo)本的收集，要注意收集時(shí)間甚或體位有可能會(huì)對(duì) 測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響,。如可的松在早晨4～6點(diǎn)之間,，會(huì)有一峰值出現(xiàn)：生長(zhǎng)激素、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發(fā)性方式釋放,，因此,，在ELISA試劑盒測(cè)定此類激素時(shí)，有必要在密切相連的時(shí)間間隔內(nèi)采取數(shù)份血樣本,，以其中間值為測(cè)定值,。又如當(dāng)從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r(shí)，血清中腎素活性將出現(xiàn)明顯增高,。再如治療藥物 的檢測(cè),，應(yīng)根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)選擇服藥后的zui適時(shí)間抽血檢測(cè)。用于傳染性病原體的抗原和抗體,、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢測(cè)的血清標(biāo)本的收集則沒(méi)有時(shí)間和體位 方面的影響,，只是在處理和保存方面要考慮以下幾個(gè)方面：
（1）要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),，其有類似過(guò)氧化物的活性,，因此，在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA試劑盒測(cè)定中,，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,，則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色,。
（2）樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,，一則細(xì)菌的生長(zhǎng)，其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用,；二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的ELISA試劑盒測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾,。
（3）血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周,，如為有菌操作,，則建議冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存,，應(yīng)在-70℃以下,。
（4）冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,，從而引起假陰性結(jié)果,。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,，不要進(jìn)行劇烈振蕩,，反復(fù)顛倒混勻即可。
曾有一地處南方的血站同行提出了一個(gè)問(wèn)題,，就是在每一年的 冬季總有那么一個(gè)多月的時(shí)間,，在做HBsAg測(cè)定的室內(nèi)質(zhì)控中，ELISA試劑盒測(cè)定由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心供應(yīng)的1 ng/ml弱陽(yáng)性樣本時(shí),，總是測(cè)不出來(lái),，不知原因?yàn)?何？這可能就與南方冬天室內(nèi)溫度較低有關(guān),，此時(shí)微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37℃溫育時(shí)間不夠,，以致弱陽(yáng)性樣本測(cè)定為陰性。