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特定ELISA試劑盒的檢測目的
閱讀：221 發(fā)布時間：2014-7-29目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制,，因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì) 量,。此外,，當試劑盒以O(shè)PD為底物時，則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前臨時配制,。 將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時,，孔內(nèi)溫度從室溫 升至37℃，需要一定的時間,，尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下,，這段升溫時間可能還比較長，ELISA試劑盒而在臨床實驗室中,，很少有人注意這個問題,，通常是將微孔 板一放入溫箱即開始計時,，這樣就很容易造成實際測定中溫育時間不夠,，弱陽性樣本測不出來的問題。
一,、臨床標本的收集和保存
用于ELISA試劑盒測定的臨床標本zui為常用的是血清（漿）,，也用到唾液,、腦脊液、尿液,、糞便等標本,。目前臨床上使用血清標本測定的標志物一般有傳染性 病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物,、激素,、特種蛋白、細胞因子和治療藥物等,。對用于激素和治療藥物測定的血清標本的收集,，要注意收集時間甚或體位有可能會對 測定結(jié)果產(chǎn)生影響。如可的松在早晨4～6點之間,，會有一峰值出現(xiàn)：生長激素,、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發(fā)性方式釋放，因此,，在ELISA試劑盒測定此類激素時,，有必要在密切相連的時間間隔內(nèi)采取數(shù)份血樣本，以其中間值為測定值,。又如當從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r,，血清中腎素活性將出現(xiàn)明顯增高。再如治療藥物 的檢測,，應(yīng)根據(jù)藥代動力學(xué)選擇服藥后的zui適時間抽血檢測,。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物和特種蛋白等的檢測的血清標本的收集則沒有時間和體位 方面的影響,，只是在處理和保存方面要考慮以下幾個方面：
（1）要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血,。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性,，因此,，在以HRP為標記酶的ELISA試劑盒測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高,，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。
（2）樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,，一則細菌的生長,，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標記的ELISA試劑盒測定方法產(chǎn)生非特異性干擾,。
（3）血清標本如是以無菌操作分離,，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存,。樣本的長時間保存,，應(yīng)在-70℃以下。
（4）冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融,。標本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,，從而引起假陰性結(jié)果。此外,，凍融標本的混勻亦應(yīng)注意,，不要進行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可,。
曾有一地處南方的血站同行提出了一個問題,，就是在每一年的 冬季總有那么一個多月的時間，在做HBsAg測定的室內(nèi)質(zhì)控中,，ELISA試劑盒測定由衛(wèi)生部臨床檢驗中心供應(yīng)的1 ng/ml弱陽性樣本時,，總是測不出來，不知原因為 何,？這可能就與南方冬天室內(nèi)溫度較低有關(guān),，此時微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37℃溫育時間不夠，以致弱陽性樣本測定為陰性,。