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人白細胞介素-15LISAELISA試劑盒 

   L-15試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知IL-15濃度的標準品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將IL-15和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后,，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,，然后加入底物A、B,，和酶結(jié)合物同時作用,。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中IL-15的濃度呈比例關系,。

操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存,，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,，不可保存,。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存,，以免變質(zhì),。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A,、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。
底物A應揮發(fā),，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值,。

樣品收集,、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
保存------如果樣品不立即使用,，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備,，不能儲存,。稀釋前將標準品振蕩混勻

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
使用前,，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差,。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復孔的盡量做復孔。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時。
甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘,。
甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
每孔加入底物A,、B各50ul，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照。
取出酶標板,，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應立即測定結(jié)果。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1,、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2,、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的IL-15標準品濃度為橫坐標（X）,，做得相應的曲線,，樣品的IL-15含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3,、檢測值范圍：0-800pg/ml

4,、敏感度： 1.0 pg/mlDA1771-0.2ml