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撫生試劑-ELISA法檢測白細(xì)胞介素-4
閱讀：198 發(fā)布時(shí)間：2014-6-6ELISA法檢測白細(xì)胞介素-4
白細(xì)胞介素-4(1L-4)是Th2細(xì)胞分泌的一類重要細(xì)胞因子,，可促進(jìn)巨噬細(xì)胞的黏附，介導(dǎo)IgE的產(chǎn)生,，在局部炎性細(xì)胞浸潤中發(fā)揮作用,，同時(shí)IL-4可使IgE受體表達(dá)增強(qiáng),，誘導(dǎo)嗜酸細(xì)胞聚集和遷移。
[檢測方法] ELISA法
[方法學(xué)原理] 在微孔反應(yīng)板上包被抗人IL-4單克隆抗體,，待測標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的IL-4會(huì)與抗人IL-4單克隆抗體結(jié)合,，游離的成分被洗去，同時(shí)加入生物素化的抗人IL-4抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素,。生物素與親和素特異結(jié)合,，抗人IL-4抗體與結(jié)合在單克隆抗體上的人IL-4結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去,。加入顯色劑,，若反應(yīng)孑L中有IL-4，HRP會(huì)使五色的顯色劑呈現(xiàn)藍(lán)色,，加終止液變黃色,。在波長450nm處測吸光度，IL-4濃度與吸光度成正比,，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中的IL-4濃度,。
[標(biāo)本準(zhǔn)備] 靜脈血2ml，不抗凝,。
[試劑]
1．預(yù)包被微孔反應(yīng)板
2．濃縮酶結(jié)合物
3．酶結(jié)合物稀釋液
4．標(biāo)準(zhǔn)晶和標(biāo)本稀釋液
5．濃縮生物素化抗體
6．IL-4標(biāo)準(zhǔn)品
7．濃縮洗滌液
8．顯色劑A,、B
9．終止液
[儀器] 酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測儀。
[檢測步驟]
1．在微孔反應(yīng)板相應(yīng)孔中分別加入待測樣本,、不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul,，再加生物素化抗體．工作液50ul。
2．振蕩混勻,，置20～25℃環(huán)境中溫育120min,。
3．將孔內(nèi)液體吸干，用洗滌液充分洗滌5次,，干燥,。
4．除空白孔外，加入酶結(jié)合物工作液100ul,。
5．振蕩混勻,，置20～25℃環(huán)境中溫育30min。
6．將孔內(nèi)液體吸干,，用洗滌液充分洗滌5次,，干燥。
7．每孔加入顯色劑A,、B各50fA,，輕輕振蕩混勻，37℃環(huán)境中避光顯色10min,。
8．加入終止液50tA后,，輕輕振蕩混勻,。用酶標(biāo)儀(450nm波長)測定各孔吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照,，求出IL-4水平,。
[正常參考值] 務(wù)實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)檢測方法的不同確立正常參考值范圍,。
[注意事項(xiàng)]
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫環(huán)境中平衡30min后方可使用,，未用完的微孔條用自封袋密封保存。
2．酶標(biāo)板洗滌時(shí)各孔均需加滿洗滌液,，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈,。應(yīng)設(shè)定30—60s的洗滌浸泡時(shí)間。
3．滴加試劑前應(yīng)將滴瓶翻轉(zhuǎn)數(shù)次,，使液體混勻,。滴加時(shí)瓶身應(yīng)保持垂直，以使滴量準(zhǔn)確(注意：勿將試劑滴在孔壁上),。
4．所有樣品和廢棄物都應(yīng)按傳染源處理,。終止液為2mol／L硫酸，使用時(shí)應(yīng)注意安全,。
5．每批樣本應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
6．若標(biāo)本OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線測定范圍以外，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測,。