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膠體金標(biāo)記蛋白的制備
 
    膠體金對蛋白的吸附主要取決于pH值，在接近蛋白質(zhì)的等電點或偏堿的條件下,，二者容易形成牢固的結(jié)合物,。如果膠體金的pH值低于蛋白質(zhì)的等電點時，則會聚集而失去結(jié)合能力,。除此以外膠體金顆粒的大小,、離子強度、蛋白質(zhì)的分子量等都影響膠體金與蛋白質(zhì)的結(jié)合,。
 
    1．待標(biāo)記蛋白溶液的制備  將待標(biāo)記蛋白預(yù)先對0.005Mol/L pH7.0 NaCl溶液中4℃透析,，以除去多余的鹽離子，然后100 000g4℃離心1h,，去除聚合物,。
 
    2．待標(biāo)膠體金溶液的準(zhǔn)備  以0.1Mol/L K2CO3或0.1Mol/L HCl調(diào)膠體金液的pH值。標(biāo)記IgG時,，調(diào)至9.0,；標(biāo)記McAb時,調(diào)至8.2；標(biāo)記親和層析抗體時,，調(diào)至7.6,；標(biāo)記SPA時,，調(diào)至5.9～6.2；標(biāo)記ConA時,，調(diào)至8.0,；標(biāo)記親和素時，調(diào)至9～10,。由于膠體金溶液可能損壞pH計的電板,，因此，在調(diào)節(jié)pH時,，采用精密pH試紙測定為宜,。
 
    3．膠體金與標(biāo)記蛋白用量之比的確定
    （1）根據(jù)待標(biāo)記蛋白的要求，將膠體金調(diào)好pH之后,，分裝10管,，每管1ml。
    （2）將標(biāo)記蛋白（以IgG為例）以0.005Mol/L pH9.0硼酸鹽緩沖液做系列稀釋為5µg/ml～50µg/ml,，分別取1ml,，加入上列金膠溶液中，混勻,。對照管只加1ml稀釋液。
    （3）5min后,，在上述各管中加入0.1ml 10％NaCl溶液,，混勻后靜置2h，觀察結(jié)果,。
    （4）結(jié)果觀察,，對照管（未加蛋白質(zhì)）和加入蛋白質(zhì)的量不足以穩(wěn)定膠體金的各管，均呈現(xiàn)出由紅變藍的聚沉現(xiàn)象,；而加入蛋白量達到或超過zui低穩(wěn)定量的各管仍保持紅色不變,。以穩(wěn)定1ml膠體金溶液紅色不變的zui低蛋白質(zhì)用量，即為該標(biāo)記蛋白質(zhì)的zui低用量,，在實際工作中,，可適當(dāng)增加10％～20％。
 
    4．膠體金與蛋白質(zhì)（IgG）的結(jié)合  將膠體金和IgG溶液分別以0.1Mol/L K2CO3調(diào)pH至9.0,，電磁攪拌IgG溶液,，加入膠體金溶液，繼續(xù)攪拌10min,，加入一定量的穩(wěn)定劑以防止抗體蛋白與膠體金聚合發(fā)生沉淀,。常用穩(wěn)定劑是5％胎牛血清（BSA）和1％聚乙二醇（分子量20KD）。加入的量：5％BSA使溶液終濃度為1％,；1％聚乙二醇加至總?cè)芤旱?／10,。