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撫生試劑-免疫組織化學(xué)組織細(xì)胞的組織切片
閱讀：672 發(fā)布時(shí)間：2014-5-14一,、載玻片的處理
免疫組化染色時(shí)間長(zhǎng)，特別是雙PAP,、免疫金銀染色等方法,，所需時(shí)間更長(zhǎng),，并要反復(fù)洗滌，切片在試劑中長(zhǎng)時(shí)間浸泡,，經(jīng)多次洗滌,，極易造成脫片而影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。需采用以下方法處理：載玻片先置于洗潔液(或洗衣粉溶液)中煮沸30min,，清水洗干凈后放人清潔液中浸泡12—24h,，漂洗，用蒸餾水清洗后置于烤箱內(nèi)干燥,，然后涂以切片黏合劑。
切片黏合劑的配制方法如下,。
(1)明礬—明膠的配制方法 明礬,、明膠各1g，加入到100ml 1％甘油中,，加熱至70~C熔化,，并攪拌混合至*透明狀，將切片浸入此液中幾分鐘,，也可以涂在載玻片上,，36℃2h后即可使用。
(2)合成乳膠—聚醋酸乙烯乳液的配制方法 合成乳膠是一種高分子乳化聚合物,，具有高度黏合力,，無毒、無臭,、無腐蝕性,。取合成乳膠10份，加蒸餾水90份,，攪拌成10％的使用液備用,。載玻片可以浸泡此液中，也可以涂片,。浸泡時(shí)濃度稀一點(diǎn),；用于涂片濃度高一點(diǎn)，涂完后在36~C中5h后即可使用,。
(3)多聚賴氨酸 0．05％多聚賴氨酸(分子質(zhì)量200kDa)水溶液,，臨用時(shí)現(xiàn)配，電吹風(fēng)吹干即可使用,。
(4)進(jìn)口切片黏合劑 此膠屬樹脂膠,，國外作為木材的黏合劑。涂膠方法同(1),，即直接涂片或浸入涂片,。一般買回來的黏合劑需10％稀釋,。
(5)甲醛—明膠 1％明膠5mi，2％甲醛5ml,，混合即可涂片,。
(6)明膠—鉻明礬—戊二醛黏合劑 載玻片在10％Extron中65℃清洗60min，用熱水沖洗60min,，雙重蒸餾水洗2次,，空氣干燥，然后浸在0．5％明膠—0．05％鉻明礬液(注：先將0．5％明膠60~C溶解,，冷卻后加入鉻明礬)中,，40~C浸浴lmin，空氣干燥,，用0,。2％戊二醛(PBS配制)固定60min，PBS洗后,，切片空氣干燥,，于4~C保存。
(7)白膠—多聚賴氨酸混合液—取進(jìn)口切片黏合劑10ml,，加10mg多聚賴氨酸混勻,，即可用于涂片。
二,、石蠟切片
石蠟切片不僅是常規(guī)病理中的重要切片形式,，也是免疫組化研究中較常用的切片形式，它能滿足免疫組化的連續(xù)切片要求,。為了便于染色及觀察,，切片時(shí)應(yīng)注意：①連續(xù)切片時(shí)應(yīng)按順序分離及貼片，不應(yīng)顛倒,；②貼片時(shí)應(yīng)距載玻片一端至少1cm,，一般靠一邊，以利于顯色安全,；③用于免疫組織化學(xué)染色的蠟溫應(yīng)為56—58℃,，切片水溫在40℃左右，應(yīng)先置于冷水中,，然后再移人熱水中,，這樣可以使切片能順利展平；④切片刀要求快,，切片要薄,，無刀痕和皺褶，在染色時(shí)可減少非特異染色；⑤烤片時(shí)要注意,，抗原性較強(qiáng)的組織可在60℃烤3—8h,，抗原較弱的組織可于37℃恒溫箱內(nèi)；⑥切片如需長(zhǎng)期保存,，可置于4℃或室溫下,，千萬不可脫蠟后4℃保存，因脫蠟后失去了對(duì)抗原決定簇的保護(hù),。
三,、冰凍切片
冰凍切片的優(yōu)點(diǎn)是能較完整地保存抗原性。組織細(xì)胞的某些抗原成分,，特別是細(xì)胞膜抗原,、受體抗原、酶及肽類抗原在石蠟切片的處理過程中,，可不同程度遭受破壞或失去抗原性,，而冰凍切片就能zui大限度地保護(hù)抗原。缺點(diǎn)是在冷凍過程中形態(tài)結(jié)構(gòu)可能破壞,，抗原易彌散，不能用于常規(guī)病檢及回顧性研究,。