技術(shù)文章
撫生試劑-ELISA(雙抗體夾心法)—檢測HBsAg
閱讀:157 發(fā)布時間:2014-4-3
ELISA(雙抗體夾心法)—檢測HBsAg
【摘要】:以已知抗體(抗HBs)包被載體,,然后將含有抗原的待檢標本加入,,共同孵育后,,抗原結(jié)合于包被抗體上,再加入酶標記特異抗體(酶標抗HBs),,酶標抗體連接到抗原上,,zui后加入底物溶液,根據(jù)顏色反應(yīng)來判定抗原含量,。 【材料】HBsAg試劑盒,,本試劑盒含: 1、包被抗-HBs反應(yīng)條 1瓶 2,、酶結(jié)合物 1瓶 3,、HBsAg陽性對照 1瓶 4、HBsAg陰性對照 1瓶 5,、洗滌液:用前每瓶作1:20稀釋 1瓶 6,、顯色劑(
相關(guān)專題 ELISA免疫實驗技術(shù) 以已知抗體(抗HBs)包被載體,,然后將含有抗原的待檢標本加入,共同孵育后,,抗原結(jié)合于包被抗體上,,再加入酶標記特異抗體(酶標抗HBs),酶標抗體連接到抗原上,,zui后加入底物溶液,,根據(jù)顏色反應(yīng)來判定抗原含量。
【材料】HBsAg試劑盒,,本試劑盒含:
1,、包被抗-HBs反應(yīng)條
1瓶
2、酶結(jié)合物
1瓶
3,、HBSAg陽性對照
1瓶
4,、HBsAg陰性對照
1瓶
5、洗滌液:用前每瓶作1:20稀釋
1瓶
6,、顯色劑(TMB)A
1瓶
7,、顯色劑(TMB)B
1瓶
8、終止液
1瓶
【方法】
1,、加入待測標本每孔0.05ml,,并設(shè)HBsAg陽性對照2孔,HBsAg陰性對照2孔,,空白對照1孔,,然后加入酶結(jié)合物每孔1滴(0.05ml、空白對照孔不加),,充分混勻后置37℃孵育30分鐘,。
2、洗板:棄去反應(yīng)條孔內(nèi)液體,、拍干,、用洗滌液注滿每孔,棄去拍干,,反復(fù)五次后拍干,。
3、顯色劑:先加顯色劑A每孔1滴(0.05ml),,然后再加顯色劑B每孔1滴(0.05ml),,混勻,37℃孵育10分鐘,。
4,、每孔加終止液1滴(0.05ml),混勻,。
【結(jié)果】
比色法:波長450nm,,先用空白孔校零點,,然后讀取各孔光密度值。
樣品OD值/陰性對照平均OD值≥ 2.1判斷為陽性,,否則為陰性,。
備注:陰性對照平均OD值低于0.05作0.05計算,高于0.05按實際OD值計算,。陽性對照OD值≥0.8,,實驗結(jié)果有效。
【注意事項】
1,、試劑盒置2℃~8℃保存,。
2、使用前試劑應(yīng)搖勻,,并棄去1~2滴后垂直滴加,。
3、從冷藏環(huán)境中取出試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測標本所需微孔條,,置室溫平衡30分鐘后再行測試,,余者應(yīng)及時封存于冰箱中以備后用。
4,、待測標本不可用NaN3防腐,。
5、不同批號試劑請勿通用,。
6,、結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。
7,、若濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶時,,請置37℃至溶解。