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撫生試劑-酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定傷寒桿菌“O”抗體
閱讀:137 發(fā)布時間:2014-3-31酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定傷寒桿菌“O”抗體
【摘要】:酶聯(lián)免疫吸附試驗是用酶標記的抗體(或SPA)檢測未知抗原或抗體的方法。此法敏感性高,特異性強。常用的是ELISA方法,,間接法,雙抗體法和抗原法,。本次試驗介紹,,酶聯(lián)葡萄球菌蛋白A免疫分析法。ELISA法原理如下,,見圖9 1.加抗原使之吸附于固相載體(如塑料反應板) 2.洗滌加待測血清 3.洗滌加酶標記SpA 4.洗滌加酶的底物,。經酶的催化產生有色產物。 材料: 1.聚乙烯塑料反應
相關專題 ELISA免疫實驗技術 酶聯(lián)免疫吸附試驗是用酶標記的抗體(或SPA)檢測未知抗原或抗體的方法,。此法敏感性高,,特異性強。常用的是ELISA方法,,間接法,,雙抗體法和抗原法。本次試驗介紹,,酶聯(lián)葡萄球菌蛋白A免疫分析法,。ELISA法原理如下,見圖9
1.加抗原使之吸附于固相載體(如塑料反應板)
2.洗滌加待測血清
3.洗滌加酶標記SpA
4.洗滌加酶的底物,。經酶的催化產生有色產物,。
材料:
1.聚乙烯塑料反應板(PH9.6時可吸附蛋白Ag)
2.抗原:傷寒桿菌O901煮沸或超聲波粉碎抗原
3.待測血清
4.凍干酶聯(lián)葡萄球菌A蛋白(HRD—proteinA)純品
5.鄰苯二胺(OPD)
6.包被液:0.05M碳酸鈉—碳酸氫鈉溶液PH9.6
7.稀釋液:10%免疫血清PBS—吐溫20,防止非特異性吸附
8.洗滌液:0.02MTrisTWeen20,Ph7.4防止非特異性吸附
9.底物溶液:0.02M磷酸氫二鈉25.7毫升
0.1M檸檬酸24.3毫升
蒸餾水50毫升
臨用前新鮮配制,,在上述緩沖液中溶解40毫克鄰苯二胺,,然后加入30%雙氧水0.15毫升,底物對光敏感,,需要避光并立即使用,。
10.終止液;2M硫酸
方法:
1.抗原包被
取潔凈的聚苯乙烯微量反應板,于每孔內加傷寒抗原0.1毫升(用包被緩沖液稀釋,,蛋白含量10微克/毫升),,置37℃1小時,棄抗原液,,用洗滌液3次每次3分鐘,。
2.加待測血清
于每孔內分別加不同稀釋度(如1:5,1:10,,1:20…1:80)的待測血清,,PBS空白對照,陰性對照血清,,陽性對照血清各0.1毫升,。置37℃30分鐘,,洗滌3次。
3.加酶聯(lián)A蛋白
于每孔加酶聯(lián)A蛋白各0.1毫升,,置37℃20分鐘,洗滌3次,。
4.加臨時配制的底物溶液各0.1毫升,,置暗處15分鐘。加2M碳酸1滴終止反應,。
5.結果判斷:(肉眼判斷)
若顏色于陰性對照相同則為陰性,,若較陰性對照深則為陽性,根據顏色深淺以(+)表示,。