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技術(shù)文章

96T人甲硫-腦啡肽(Met-Enk) ELISA 檢測試劑盒

閱讀:1051          發(fā)布時間:2012-11-13
人甲硫-腦啡肽(Met-Enk) ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用  標(biāo)本:血清或血漿
 
本公司專業(yè)elisa試劑盒供應(yīng)商/代理商,質(zhì)量保證,價格低,,是國家重點實驗室及國內(nèi)各大院校長期供應(yīng)商,,
各種種屬 :人、大小鼠、豚鼠,、兔子、豬,、犬,、猴、馬,、牛、羊,;標(biāo)本 :血清,、血漿,、細(xì)胞上清液、尿液,、體液,、灌洗液,、腦脊髓、心房水,、胸房水等 ;本公司實驗室*提供代測服務(wù),,詳細(xì)信息?。?6- / 31255782
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:www.shfsbio.com
試驗原理:
Met-Enk試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知Met-Enk濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測,。先將Met-Enk和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育,。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌,,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A,、B,,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中Met-Enk的濃度呈比例關(guān)系,。
 
人甲硫-腦啡肽(Met-Enk) ELISA 檢測試劑盒試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制
96/48人份酶標(biāo)板1塊板(96T)半塊板(48T)即用型
塑料膜板蓋1塊半塊即用型
標(biāo)準(zhǔn)品:800ug/ml1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按說明書進(jìn)行稀稀
空白對照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型
生物素標(biāo)記的抗Met-Enk抗體1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型
親和鏈酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型
洗滌緩沖液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按說明書進(jìn)行稀釋
底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
標(biāo)本稀釋液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型
 
自備材料
1.蒸餾水。
2.加樣器:5ul,、10ul、50ul,、100ul,、200、500ul,、1000ul,。
3.振蕩器及磁力攪拌器等。
 
安全性
1.避免直接接觸終止液和底物A、B,。一旦接觸到這些液體,,請盡快用水沖洗。
2.實驗中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品,。
3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
 
操作注意事項
1.試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存,。
2.實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,以免變質(zhì),。
3.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A、B液時,,避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6.洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7.底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
8.加入試劑的順序應(yīng)一致,,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
9.按照說明書中標(biāo)明的時間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。
 
樣品收集、處理及保存方法
1,、血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2,、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3,、細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,,取上清液
5、保存------如果樣品不立即使用,,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
 
人甲硫-腦啡肽(Met-Enk) ELISA 檢測試劑盒試劑的準(zhǔn)備
1.標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備,不能儲存,。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻,。稀釋比例按下表中進(jìn)行:
800 ug/ml(6號標(biāo)準(zhǔn)品)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
400 ug/ml(5號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200 ug/ml(4號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100 ug/ml(3號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50 ug/ml(2號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25 ug/ml(1號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 ug/ml(空白對照)原始濃度不用稀釋直接加入50ul,。
 
2.洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋,。
 
 
操作步驟
1.使用前,將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3.加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育1小時。
4.甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次,。
5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育30分鐘,。
6.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次,。
7.每孔加入底物A,、B各50ul,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育10分鐘,。避免光照。
8.取出酶標(biāo)板,,迅速加入50ul終止液,,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9.在450nm波長處測定各孔的OD值,。
 
建議使用的實驗方案
標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ug/ml)
A800800樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
B400400樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
C200200樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
D100100樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
E5050樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
F2525樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
 
 
局限
6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。
 
試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品,。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng),。
3. 重復(fù)性:板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%,。
 
結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
 
2,、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),,相應(yīng)的Met-Enk標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,,樣品的Met-Enk含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,。
 
3、檢測值范圍:0-800ug/ml
 
4,、敏感度: 1.0 ug/ml
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