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本試劑僅供研究使用  標(biāo)本：血清或血漿

 

本公司專業(yè)elisa試劑盒供應(yīng)商/代理商,，質(zhì)量保證，價格低,，是國家重點實驗室及國內(nèi)各大院校長期供應(yīng)商,，

各種種屬 ：人、大小鼠,、豚鼠,、兔子、豬,、犬,、猴、馬,、牛,、羊；標(biāo)本 ：血清,、血漿,、細胞上清液、尿液,、體液,、灌洗液、腦脊髓,、心房水,、胸房水等 ；本公司實驗室*提供代測服務(wù),，詳細信息?。?6- / 31255782

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試驗原理：

Met-Enk試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知Met-Enk濃度的標(biāo)準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測,。先將Met-Enk和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育,。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B,，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中Met-Enk的濃度呈比例關(guān)系,。

 

人甲硫-腦啡肽（Met-Enk） ELISA 檢測試劑盒試劑盒內(nèi)容及其配制

試劑盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制

96/48人份酶標(biāo)板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型

塑料膜板蓋1塊半塊即用型

標(biāo)準品：800ug/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按說明書進行稀稀

空白對照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型

標(biāo)準品稀釋緩沖液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型

生物素標(biāo)記的抗Met-Enk抗體1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型

親和鏈酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型

洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按說明書進行稀釋

底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

終止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

標(biāo)本稀釋液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型

 

自備材料

1．蒸餾水。

2．加樣器：5ul,、10ul,、50ul、100ul,、200,、500ul、1000ul,。

3．振蕩器及磁力攪拌器等,。

 

安全性

1．避免直接接觸終止液和底物A、B,。一旦接觸到這些液體,，請盡快用水沖洗。

2．實驗中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品,。

3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

 

操作注意事項

1．試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,，使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標(biāo)準品應(yīng)丟棄，不可保存,。

2．實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存，以免變質(zhì),。

3．不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。

4．使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器,。

5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。

6．洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

7．底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,，有毒,。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

8．加入試劑的順序應(yīng)一致,，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣,。

9．按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作,。

 

樣品收集,、處理及保存方法

1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。

2,、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3,、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,，取上清液

5、保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

 

人甲硫-腦啡肽（Met-Enk） ELISA 檢測試劑盒試劑的準備

1．標(biāo)準品：標(biāo)準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備，不能儲存,。稀釋前將標(biāo)準品振蕩混勻,。稀釋比例按下表中進行：

800 ug/ml（6號標(biāo)準品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。

400 ug/ml（5號標(biāo)準品）100ul的原倍標(biāo)準品加入100ul的標(biāo)準品稀釋液

200 ug/ml（4號標(biāo)準品）100ul的5號標(biāo)準品加入100ul的標(biāo)準品稀釋液

100 ug/ml（3號標(biāo)準品）100ul的4號標(biāo)準品加入100ul的標(biāo)準品稀釋液

50 ug/ml（2號標(biāo)準品）100ul的3號標(biāo)準品加入100ul的標(biāo)準品稀釋液

25 ug/ml（1號標(biāo)準品）100ul的2號標(biāo)準品加入100ul的標(biāo)準品稀釋液

0 ug/ml（空白對照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

 

2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋,。

 

 

操作步驟

1．使用前,，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2．根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標(biāo)準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。

3．加入稀釋好后的標(biāo)準品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時。

4．甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。

5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。

6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。

7．每孔加入底物A,、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。

8．取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。

9．在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

建議使用的實驗方案

標(biāo)準品濃度（ug/ml）

A800800樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

B400400樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

C200200樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

D100100樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

E5050樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

F2525樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

 

 

局限

6號標(biāo)準品以上的結(jié)果為非線性的,，根據(jù)此標(biāo)準曲線無法得到的結(jié)果,。

 

試劑盒性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準品。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990,。

2. 特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)。

3. 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%,。

 

結(jié) 果 判 斷 與 分 析

1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

 

2,、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y）,，相應(yīng)的Met-Enk標(biāo)準品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線,，樣品的Met-Enk含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準曲線換算出相應(yīng)的濃度,。

 

3、檢測值范圍：0-800ug/ml

 

4,、敏感度： 1.0 ug/ml

猴載脂蛋白B100（apo-B100）ELISA試劑盒 Monkey apoprotein B100,apo-B100 ELISA試劑盒

猴載脂蛋白A1（apo-A1）ELISA試劑盒 Monkey apoprotein A1,apo-A1 ELISA試劑盒

猴白介素6（IL-6）ELISA試劑盒Monkey Interleukin 6,IL-6 ELISA試劑盒

猴γ干擾素（IFN-γ）ELISA試劑盒Monkey Interferon γ ,IFN-γ ELISA試劑盒

猴胰島素（INS）ELISA試劑盒 Monkey Insulin,INS ELISA試劑盒

猴子巨噬細胞移動抑制因子（MIF）ELISA試劑盒Monkey Macrophage Migration Inhibitory Factor,MIF ELISA試劑盒

駱駝β內(nèi)啡肽（β-EP）ELISA試劑盒Camel Beta-Endorphin,β-EP ELISA試劑盒

駱駝脂蛋白磷脂酶A2（Lp-PL-A2）ELISA試劑盒Camel lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PL-A2 ELISA試劑盒 

駱駝內(nèi)皮素1（ET-1）ELISA試劑盒Camel Endothelin 1,ET-1 ELISA試劑盒 

駱駝轉(zhuǎn)化生長因子β2（TGFβ2）ELISA試劑盒Camel transforming growth factors β2,TGFβ2 ELISA試劑盒 

馬生長激素（GH）ELISA試劑盒Equine growth hormone,GH ELISA試劑盒

馬主要組織相容性復(fù)合體（MHC/ELA）ELISA試劑盒Equine major histocompatibility complex,MHC/ELA ELISA試劑盒 

馬免疫球蛋白E（IgE）ELISA試劑盒Equine Immunoglobulin E,IgE ELISA試劑盒 

馬β淀粉樣蛋白1-40（Aβ1-40）ELISA試劑盒Equine amyloid beta peptide 1-40,Aβ1-40 ELISA試劑盒

馬β內(nèi)啡肽（β-EP）ELISA試劑盒Equine Beta-Endorphin,β-EP ELISA試劑盒

山羊磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）ELISA試劑盒Goat Phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK ELISA試劑盒 

山羊P選擇素（P-Selectin/CD62P/GMP140）ELISA試劑盒Goat P-Selectin/CD62P/GMP-140 ELISA試劑盒

山羊促生長激素釋放激素（GHRH）ELISA試劑盒Goat growth hormone releasing hormone,GHRH ELISA試劑盒

山羊生長激素釋放多肽（GHRP）ELISA試劑盒Goat Growth Hormone Releasing Peptide,GHRP ELISA試劑盒 

山羊白介素4（IL-4）ELISA試劑盒 Goat Interleukin 4,IL-4 ELISA試劑盒