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技術(shù)文章

免費(fèi)代測人釀酒酵母抗體ELISA 檢測試劑盒說明書

閱讀:292          發(fā)布時(shí)間:2012-11-6

人釀酒酵母抗體ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用  標(biāo)本:血清或血漿

試驗(yàn)原理:
ASCA-Ab試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知ASCA-Ab濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測,。先將ASCA-Ab和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,,加入親和素標(biāo)記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,,然后加入底物A,、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用,。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中ASCA-Ab的濃度呈比例關(guān)系。

試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標(biāo)板 1塊板(96T) 半塊板(48T) 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品:40IU/ml 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按說明書進(jìn)行稀稀
空白對照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型
生物素標(biāo)記的抗ASCA-Ab抗體 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型
洗滌緩沖液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按說明書進(jìn)行稀釋
底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
終止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
標(biāo)本稀釋液 1瓶(12ml) 1瓶(6.0ml) 即用型

人釀酒酵母抗體ELISA 檢測試劑盒自備材料
1. 蒸餾水,。
2. 加樣器:5ul,、10ul、50ul,、100ul,、200ul、500ul,、1000ul,。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A,、B,。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗,。
2. 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品,。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項(xiàng)
1. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存,。
2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,以免變質(zhì),。
3. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A、B液時(shí),,避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6. 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
7. 底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,,避免長時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸,有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
8. 加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。
9. 按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

樣品收集,、處理及保存方法
1,、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2,、 血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3,、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4,、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,取上清液
5,、 保存------如果樣品不立即使用,,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準(zhǔn)備
1. 標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,,不能儲存,。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:
40 IU/ml (6號標(biāo)準(zhǔn)品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul,。
20 IU/ml (5號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10 IU/ml (4號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5.0 IU/ml (3號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.5 IU/ml (2號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.25 IU/ml (1號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 IU/ml (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加入50ul,。

2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
1. 使用前,,將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,,產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。
3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體,。蓋上膜板,,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí),。
4. 甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次,。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育30分鐘,。
6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次,。
7. 每孔加入底物A,、B各50ul,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育10分鐘,。避免光照。
8. 取出酶標(biāo)板,,迅速加入50ul終止液,,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值,。

人釀酒酵母抗體ELISA 檢測試劑盒建議使用的實(shí)驗(yàn)方案
 標(biāo)準(zhǔn)品濃度(IU/ml) 
A 40 40 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 20 20 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 10 10 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 5.0 5.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 2.5 2.5 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 1.25 1.25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品


局限
6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果,。

試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品,。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990,。
2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng),。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%,。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1,、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),,相應(yīng)的ASCA-Ab標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),,做得相應(yīng)的曲線,,樣品的ASCA-Ab含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3,、檢測值范圍:0-40IU/ml

4,、敏感度: 0.1 IU/ml
小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)ELISA試劑盒 Human alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 2,AFP-L2 ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)ELISA試劑盒 Human alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 1,AFP-L1 ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
黑色素瘤標(biāo)記物(MART/Melan-A)ELISA試劑盒 Human Melanoma Marker A,MART/Melan-A ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
高分子量細(xì)胞角蛋白(CK-HMW)ELISA試劑盒 Human cytokeratin High Molecular Weight,CK-HMW ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
肝癌抗原(PHC)ELISA試劑盒 Human primary hepatic carcinoma,PHC ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)ELISA試劑盒  Human apoptosis protease activating factor-1,Apaf-1 ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
鼻咽癌(NPC)ELISA試劑盒 Human nasopharyngeal carcinoma,NPC ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
膀胱癌抗原(UBC)ELISA試劑盒 Human urinary bladder cancer antigen,UBC ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
廣譜細(xì)胞角蛋白(P-CK)ELISA試劑盒 Human pan-cytokeratin,P-CK ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
癌基因蛋白質(zhì)p190/bcr-abl ELISA試劑盒 Human Oncogene Protein p190/bcr-abl ELISA試劑盒Human Oncogene Protein p190/bcr-abl ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
膀胱腫瘤抗原(BTA)ELISA試劑盒 Human Bladder tumor antigen,BTA ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
中期因子(MK)ELISA試劑盒 Human Midkine,MK ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)ELISA試劑盒 Human BH3 interacting domain death agonist,Bid ELISA試劑盒  ELISA檢測試劑盒 96T/48T
B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA試劑盒 Human B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2 ELISA試劑盒  ELISA檢測試劑盒 96T/48T
腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子(TKHF)ELISA試劑盒 Human Tumor Specific Growth Facter/tumor supplied group of factor,TKHF ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒 Human pigment epithelium-derived factor,PEDF ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16) ELISA試劑盒  Human Clara cell protein,CC16 ELISA試劑盒  ELISA檢測試劑盒 96T/48T
低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA試劑盒 Human hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
黑色素細(xì)胞抗體(MC Ab)ELISA試劑盒 Human melanocyte antibody,MC Ab ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒 Human transferrin receptor,TFR ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
P53(P53)ELISA試劑盒 Human p53/tumor protein, p53/TP53 ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
細(xì)胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒 Human Cyclin-D3 ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
細(xì)胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA  Human Cyclin-D2 ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA試劑盒 Human Cyclin-D1 ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
內(nèi)皮抑素(ES)ELISA試劑盒 Human Endostatin,ES ELISA試劑盒  ELISA檢測試劑盒 96T/48T
鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒 Human ferritin,FE ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)ELISA試劑盒 Human microtransferrinuria,MTF ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒 Human tissue inhibitor of metal protease 1,TIMP-1 ELISA試劑盒 ELISA檢測試劑盒 96T/48T
 

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