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總黃曲霉毒素酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
藥品名稱：
通用名：總黃曲霉毒素酶聯(lián)免疫診斷試劑盒
使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定組織,，細(xì)胞及其它相關(guān)樣本中總黃曲霉毒素含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中總黃曲霉毒素水平,。用純化的總黃曲霉毒素抗體
包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入總黃曲霉毒素抗原,，再與 HRP
總黃曲霉毒素酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
標(biāo)記的總黃曲霉毒素抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物
TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏
色的深淺和樣品中的總黃曲霉毒素呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD
值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中總黃曲霉毒素濃度,。
試劑盒組成
1 20 倍濃縮洗滌液 30ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（45ng/L） 0.5ml×1 瓶
總黃曲霉毒素酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張  
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔,，在*、第二孔中分別加標(biāo)
準(zhǔn)品 100μl,，然后在*,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻,；然后從*孔,、第二
孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，
混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,，再各取50μl分別加到第五、第六孔
中,，再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻,；混勻后從第五,、第六孔中各
取 50μl 分別加到第七、第八孔中,，再在第七,、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混
勻后從第七,、第八孔中分別取 50μl 加到第九,、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)
品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，
濃度分別為30ng/L,，20ng/L ,， 10ng/L，5ng/L,， 2.5ng/L）,。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、待測(cè)樣
品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣
品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混
勻。3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。    
4. 配液：將25倍濃縮洗滌液用蒸餾水25倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同 3,。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的
OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，
即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在5 分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔的*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定,，
計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
6．底物請(qǐng)避光保存,。
7．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。
10.  如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn),。
檢測(cè)范圍：
1ng/L -40ng/L
規(guī)格：
96 人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月小鼠抑瘤素M（OSM）ELISA試劑盒
小鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子可溶性受體α（PDGFsR-α）ELISA試劑盒
小鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子AB（PDGF-AB）ELISA試劑盒
小鼠P選擇素（P-Selectin/CD62P）ELISA試劑盒
小鼠L苯丙氨酸解氨酶（PAL）ELISA試劑盒
小鼠可溶性CD30配體（sCD30L）ELISA試劑盒
小鼠干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子（SCF/MGF）ELISA試劑盒
小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1β（SDF-1β/CXCL12）ELISA試劑盒
小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）ELISA試劑盒
小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ（TNFsR-Ⅰ）ELISA試劑盒