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   ELISA試劑盒試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線做的好與壞會直接影響到實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,，甚至是關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗。下面將影響ELISA試劑盒曲線問題的原因做了總結(jié)：

一 OD值不正常的可能原因是：

     1,、試劑盒未回溫,，試劑盒回溫到25℃；

     2,、溫度控制不好,，控制正確溫度；

     3,、孵育時(shí)間不準(zhǔn)確,，控制孵育時(shí)間；

     4,、洗滌時(shí)沖擊力太大,、浸泡時(shí)間過長、洗滌次數(shù)增 加,，洗滌4-5次,，每孔250ul，然后拍干,；

     5,、陽光直射，對著風(fēng)直接吹,，避風(fēng)避光,；

     6、酶標(biāo)儀的波長錯(cuò)誤,，酶標(biāo)儀的波長450nm,；

     7、抗體的稀釋錯(cuò)誤,，正確的稀釋抗體,；

     8、水質(zhì)問題,，用娃哈哈礦泉水代替,。

 

二 白板的可能原因是：

    1、洗滌液配制錯(cuò)誤，正確的配制洗滌液,；

    2,、少加液體（錯(cuò)加液體），正確的步驟加液體,。

 

三 無梯度可能原因是：

   1,、標(biāo)準(zhǔn)品也污染，換標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)板,；

   2,、OD值不正常，控制溫度時(shí)間在做一次,；

   3,、人為點(diǎn)板，不要點(diǎn)板,。

 

四 線性不好可能原因是：

OD值不正常,，控制溫度時(shí)間在做一次。

 

做標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品檢測時(shí)有幾個(gè)問題需要注意：

1,、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出來的,，所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事，否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果無從談起,。

2,、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實(shí)驗(yàn)樣品的濃度,，即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi),，包括上限和下限。而對于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線,，盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度最陡段,，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。

3,、最好采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度,，這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。

4,、檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品時(shí),，應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行，以減少高濃度對低濃度的影響,，提高準(zhǔn)確性,。

5、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個(gè)點(diǎn),，但至少要保證有5個(gè)點(diǎn),。

6、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒?yàn)要求不同而有所變動，但一般來說,，相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98，對于有些實(shí)驗(yàn),，至少要0.99甚至是0.999,。