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微生物培養(yǎng)基滅菌方法介紹
閱讀:51 發(fā)布時(shí)間:2025-1-14培養(yǎng)基是將微生物生長(zhǎng)繁殖所需要的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),用人工方法配制而成的各種營(yíng)養(yǎng)基質(zhì),。培養(yǎng)基為微生物的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生存空間,。
滅菌的方法,通??梢苑譃樗拇箢悾?/strong>
1、加熱滅菌:包括直接灼燒滅菌,、干熱滅菌,、加壓蒸汽滅菌、間歇滅菌和煮沸消毒,;
2,、過濾去菌,;
3、射線滅菌和消毒,;
4,、化學(xué)藥劑滅菌和消毒。
在本實(shí)驗(yàn)中,,介紹與培養(yǎng)基和玻璃器材滅菌有關(guān)的部份滅菌方法,。
1. 干熱滅菌法(即熱空氣滅菌法)
干熱滅菌一般是利用電熱烘箱作為干熱滅菌器,。前面所包裝好的玻璃器皿,如帶棉塞的三角瓶,,試管,、包裝好的吸管、培養(yǎng)皿等,,放入電熱烘箱中,。
打開烘箱頂部的通氣孔,接上電源加熱,,使箱內(nèi)空氣的溫度達(dá)到160℃~170℃,關(guān)閉通氣孔使箱內(nèi)的溫度保持在160℃左右并維持1.5-2h,。時(shí)間一到,切斷電源,。待溫度下降60℃~70℃以下,,方可打開箱門取滅菌物品,否則驟冷后易使箱內(nèi)玻璃儀器破損,。
2. 加壓蒸氣滅菌法
利用高壓滅菌器,使水的沸點(diǎn)在密閉的滅菌器內(nèi)隨壓力升高而增高(見表6-2),,來(lái)提高蒸汽的溫度和滅菌的效率,。
在同一溫度下濕熱的殺菌效率比干熱大,因?yàn)槲⑸锛?xì)胞蛋白質(zhì)在濕熱情況下,,易干凝固(見表6-3),。同時(shí)濕熱的穿透力強(qiáng),,當(dāng)水蒸汽與被滅菌的物品相接觸后,便放出汽化潛熱,,逐步提高被滅菌物品的溫度,,直至與水蒸汽的溫度相等,達(dá)到平衡為止,,從而提高滅菌效率,。
手提式高壓滅菌鍋滅菌的操作步驟如下:
(1),、在滅菌器內(nèi)加入一定量的水(有的滅菌器內(nèi)加水至止水線),。將用防水紙包扎好的滅菌物品如培養(yǎng)基,、無(wú)菌水等,,放進(jìn)滅菌器內(nèi)。
(2),、接通電源,,進(jìn)行加熱。
(3),、當(dāng)壓力到達(dá)5bl/in2時(shí),打開放氣閥,,使鍋內(nèi)的空氣和水蒸汽一同排出,,直至壓力表的壓力恢復(fù)到零,然后關(guān)閉排氣閥,,繼續(xù)加熱,。
(4)、當(dāng)壓力表*的壓力到達(dá)15bl/in2(即 1.05kg/cm2)時(shí),,此時(shí)滅菌器內(nèi)的溫度達(dá)到121℃,維持30min不變,。對(duì)熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基滅菌時(shí),,應(yīng)適當(dāng)降低壓力,延長(zhǎng)時(shí)間,。
(5),、滅菌時(shí)間一到,,切斷電源,待壓力下降至零時(shí),,才能打開排氣孔,,然后打開滅菌器蓋,取出物品,。如果滅菌后的固體培養(yǎng)基要做成斜面,,需趁熱放置。還需檢查培養(yǎng)基滅菌是否徹di,。
3. 間歇滅菌法
常采用阿諾(Arnold)氏滅菌器和柯赫(Koch)氏滅菌器或蒸籠滅菌,常壓條件下蒸汽溫度不超過100℃,。在沒有高壓滅菌器設(shè)備的情況下或不宜加壓滅菌的物品,,可采用此法滅菌。
方法是:待滅菌物品放在滅菌器或蒸籠里,每d蒸煮1次,,每次煮沸l(wèi)h,連續(xù)3d重復(fù)進(jìn)行,。在每?jī)纱握糁笾g,,將物品(指培養(yǎng)基)放在37C恒溫條件下培養(yǎng)過夜,這樣可以使每次蒸煮后未殺死的殘留芽孢萌發(fā)成營(yíng)養(yǎng)體,,以便下1次蒸煮時(shí)殺滅,。
4. 過濾除菌法
一些不能加熱滅菌的液體物質(zhì)(如維生素,、血清),可以用過濾除菌法,,一般用細(xì)菌過濾器進(jìn)行除菌,。(教師示范)
細(xì)菌過濾器中的過濾板常用陶瓷、硅藻土或石棉等做成,,過濾板孔眼很小,,細(xì)菌不能通過,。因此,過濾后的液體就除去了細(xì)菌,。在進(jìn)行過濾除菌前,整個(gè)細(xì)菌過濾器和接受液體的器皿,,必須要包裝妥當(dāng)并進(jìn)行加壓蒸汽滅菌后方可使用,。
下面介紹石棉板濾器的構(gòu)造及其操作方法。石棉板濾器又稱蔡氏(Scitz)濾器,,它是由石棉制成的圓形濾板和一個(gè)特制漏斗組成,。此漏斗分上下兩節(jié),。上節(jié)為圓形金屬筒,下節(jié)為金屬漏斗,。兩節(jié)由三個(gè)活動(dòng)螺旋固定,,便于裝卸。使用時(shí)拆開兩節(jié),,將濾板放在漏斗上的金屬篩板,,再加上上節(jié),然后將螺旋扭緊,將欲濾溶液置于濾器中抽濾,。每次過濾必須用一張無(wú)菌的新濾板。石棉板濾器因容積大小不同而有各種型號(hào),,石棉板也有不同規(guī)格型號(hào)使用時(shí)必須根據(jù)需要搭配妥當(dāng),。
5. 紫外線滅菌
波長(zhǎng)260~280nm之間的紫外線有很強(qiáng)的殺菌能力,一般紫外燈管能產(chǎn)生253.7nm的紫外光,,殺死力強(qiáng)而穩(wěn)定,,但穿透力弱一般只適宜物體表面,、空氣滅菌,。例如接種室,、培養(yǎng)室、手術(shù)室,、藥廠包裝室等空氣滅菌,。一般30w燈管、9m3空間,,距地面2m每次打開紫外線照射0.5h,,就使室內(nèi)空氣滅菌。若照射紫外線時(shí),,先噴灑石碳酸等化學(xué)消毒劑,可增強(qiáng)滅菌效果,。
在進(jìn)行微生物接種和分離等操作時(shí),,常須用紫外線來(lái)殺滅接種室(箱)空氣、臺(tái)面等處的微生物,。
紫外線雖有較強(qiáng)的殺菌力,,但穿透力較弱,即使一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除,,因此只適用于空氣及表面殺菌。
紫外線對(duì)眼粘膜及視神經(jīng)有強(qiáng)烈的損傷作用,,對(duì)皮膚有刺激作用,,所以不能直接在紫外線燈開啟下工作和用眼睛直視開啟的紫外燈。
6. 化學(xué)藥劑消毒滅菌
微生物實(shí)驗(yàn)室中常用的化學(xué)殺菌劑有升,、甲醛,、高錳酸鉀、酒精,、碘酒,、龍膽紫、石炭酸,、漂白粉,、新潔爾滅、煤酚皂溶液,,它們有的是殺菌劑,有的是抑菌劑,。