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抗體在各個實驗中的應(yīng)用
閱讀：92 發(fā)布時間：2024-12-24抗體是一種由漿細胞（效應(yīng)B細胞）分泌,，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細菌,、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì),，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細胞的細胞膜表面,?？贵w能識別特定外來物的一個特征，該外來目標(biāo)被稱為抗原,。
1. 做流式的抗體和免疫組化的抗體是一樣的嗎?
不一定能通用,。流式是用直接標(biāo)記還是間接標(biāo)記?如果是直接標(biāo)記的話，那這個抗體一般不是FITC標(biāo)記或者就是TRITC,，PE之類的,。如果恰好你的免疫組化，也是想用熒光素標(biāo)記的抗體來直接標(biāo)記,，那就可以通用,。如果你的免疫組化要用其它的標(biāo)記的話，或者是間接標(biāo)記的話,，就有麻煩,，因為熒光素的標(biāo)記很可能會影響二抗和一抗的結(jié)合。
2. 為什么我的抗體做WB非常好,，而做不了IF,，IHC等其他任何實驗?
首先恭喜你有一個WB非常好的抗體，畢竟能獲得做WB非常好的抗體也不容易,。其次,，你這個抗體很可能是通過人工合成多肽得到的，和上面所述,，你用來做抗原的多肽恰好被包埋在蛋白質(zhì)的中心,，因此只能識別WB中線性的部分,。
3. 如何選擇免疫組化抗體?
首先，一抗是選擇單克隆抗體還是多克隆抗體,，單克隆抗體特異性強,，靈敏度低;多克隆抗體靈敏度高，特異性弱,。根據(jù)你的實驗結(jié)果，如果非特異多,，那么選擇單克隆抗體;如果陽性信號弱,，不妨選擇多克隆抗體試試。一般家兔來源的都是多克隆,，小鼠來源的是單克隆,。其次是要弄明白該一抗能夠識別什么種屬的抗原，抗體說明書上面一般注明有,，比如小鼠Mus, 大鼠Rat, 人Hum,。再次比較重要的是要注意一抗的來源。比如我們在人的癌組織中做p53的免疫組化,，一抗我們采用的是小鼠來源的p53抗體,，那么二抗我們一定要選擇抗小鼠的二抗比如(山羊抗小鼠，兔抗小鼠),，這一點非常重要,。最后，一般的抗體說明書都會注明能做什么實驗,，如果標(biāo)明了不可以做免疫組化,，一定不要選擇;反過來說，即使標(biāo)明了可以做免疫組化,，也不一定能夠做,，商家只會夸大其效果。
4. WB和IF的二抗是一樣的嗎?
很明顯,，不是!免疫熒光抗體是用于 免疫熒光試驗的,，是用FITC或PE等標(biāo)記的抗體，結(jié)果需要紫外線激發(fā)并用熒光顯微鏡觀察WB抗體一般是HRP或堿性磷酸酶等標(biāo)記的抗體,，需顯色底物(如OPDTMB等)直接顯色(肉眼)或化學(xué)發(fā)光法顯影(需特殊儀器),。
5. 做CHIP的抗體是否可以用來做WB抗體?
不一定，一般來說做CHIP級別的抗體對抗體純度特異性方面都要求比較高,，基本上能做CHIP的抗體都可以做WB,。但是如果CHIP的抗體識別的是構(gòu)象表位(比如是由兩個實際靠在一起但變?yōu)榫€性結(jié)構(gòu)之后相隔很遠的兩端序列)，而不是線性表位,，這種CHIP抗體做不了WB,。
6. 抗體說明書上面沒有寫該抗體能夠用于某項實驗怎么辦?
一般而言,，抗體研發(fā)出來之后都要經(jīng)過WB，IP,，IF,，IHC實驗。檔發(fā)現(xiàn)濃度不夠做IF,，IHC時候,，國外的抗體一般都是寫未檢測，國內(nèi)的抗體一般是不寫,。所以盡量不要抱著試試的心里去嘗試,，往往只會浪費時間。你想啊,，如果抗體能夠做該實驗,，他們肯定會寫上去啊。
7. 做ELISA的抗體能否用來做WB?
通常用WB抗體稀釋濃度為1:1000,，IF/IHC為1:100,，而如果可以做ELISA則可以稀釋1:10000。如果一個抗體用來做ELISA的,，那么言外之意就是該抗體效價不高,。但不是說ELISA的抗體不能用于做WB，抗體說明書提示做ELISA稀釋比例為1:1000,，那么你可以試試1:100做做WB,。