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大鼠 SCUBE1ELISA試劑盒試驗操作步驟及注意事項
閱讀：98 發(fā)布時間：2024-8-19試驗原理：
大鼠 SCUBE1ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質(zhì)濃度的標準品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測,。先將待測物質(zhì)和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后,，加入親和素標記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,，然后加入底物A,、B，和酶結(jié)合物同時作用,。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中待測物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系。
大鼠 SCUBE1ELISA試劑盒操作步驟：
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔 10 孔,，在第一,、第二孔中分別加標準品 100μl，然后在第一,、第二孔中加標準品稀釋液 50μl,，混勻；然后從第一孔,、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔,，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl,，混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl 分別加到第五,、第六孔中,，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,，混勻,；混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七,、第八孔中,，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,，混勻后從第七,、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50μl,，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50μl，濃度分別為 180ng/L,，120ng/L ,，60ng/L，30ng/L,， 15ng/L）,。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。
4. 配液：將 25 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 25 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去,，如此重復(fù) 5 次,，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl,，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
大鼠 SCUBE1ELISA試劑盒注意事項:
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線,，最好做復(fù)孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值大于標準品孔的第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定,，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存,。
7．試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準,。