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各種細胞培養(yǎng)基類型概述
閱讀:148 發(fā)布時間:2024-5-6細胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細胞中供給細胞營養(yǎng)和促使細胞生殖增殖的基礎物質,,也是培養(yǎng)細胞生長和繁殖的生存環(huán)境,。常見的種類如下:
1,、無機鹽
培養(yǎng)液中無機鹽的主要功能是幫助細胞維持滲透壓平衡,。此外,通過提供鈉,,鉀和鈣離子,,幫助細胞調(diào)節(jié)細胞膜功能。
培養(yǎng)液的滲透壓是一個非常重要的因素,, 細胞通??赡褪?60mOsm/kg 320 mOsm/kg。標準培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動,。
特別注意:向培養(yǎng)液中加入其它物質有可能會明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓,,特別是溶于強酸或強堿中的物質。向培養(yǎng)液中添加HEPES時需按以下方法調(diào)節(jié)鈉離子濃度,。
2,、 氨基酸
氨基酸是組成蛋白質的基本單位,不同種類的細胞對氨基酸的要求各異,,但有幾種氨基酸細胞自身不能合成,,必須依靠培養(yǎng)液提供,,這幾種氨基酸稱為必需氨基酸。
其中谷氨酰胺是細胞合成核酸和蛋白質必需的氨基酸,,在缺少谷氨酰胺時,,細胞生長不良而死亡。因此,,各種培養(yǎng)液中都有較大量的谷氨酰胺,。
但由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,應置于-20℃冰箱中保存,,在使用前加入培養(yǎng)液內(nèi),。已含谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4℃冰箱中儲存2周以上時,還應重新加入原來量的谷氨酰胺,。
3,、碳水化合物
碳水化合物是細胞生長主要能量來源,其中有的是合成蛋白質和核酸的成分,。主要有葡萄糖,,核糖,脫氧核糖,,丙酮酸鈉和醋酸等,。
4、維生素
在細胞培養(yǎng)中,,盡管血清是維生素重要來源,, 但是許多培養(yǎng)基中添加了各種維生素以適合更多的細胞系生長。
5,、緩沖系統(tǒng)
大多數(shù)細胞所需pH 在 7.2 - 7.4,。但細胞培養(yǎng)適pH值隨培養(yǎng)的細胞種類不同而不同。成纖維細胞喜歡較高pH (7.4 - 7.7),, 而傳代轉化細胞系則需要偏酸pH (7.0 - 7.4),。由于多數(shù)培養(yǎng)液靠碳酸氫鈉(NaHCO3)與CO2體系進行緩沖,因此氣相中的CO2濃度應與培養(yǎng)液中碳酸氫鈉濃度相平衡,。
如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2濃度設定在5%,,培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為1。97g/L;如果CO2濃度維持在10%,,培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為3,。95g/L。
細胞培養(yǎng)瓶蓋不應擰得太緊,,以保證氣體交換,。 HEPES 是一種非離子緩沖液,在pH 7.2 - 7.4 范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力,但是非常昂貴,,在高濃度時對一些細胞可能有毒,。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉(0.34g/L)共用,以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加,。
在這種培養(yǎng)條件下,,細胞培養(yǎng)瓶的蓋子應擰緊,以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中,,大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH指示劑,,酸性培養(yǎng)液呈橙黃色,堿性培養(yǎng)液呈深紅色,。
6,、 其它成分
在一些較為復雜的培養(yǎng)液中還包括其它一些成分。如在雜交瘤技術中常用的DMEM培養(yǎng)液,,使用時還需要補加丙酮酸鈉和2-巰乙醇(2-Mercaptoethanol,,2-Me)。
2-Me 對細胞生長有很重要的作用,。有人認為它相當于胎牛血清,,有直接刺激細胞增殖作用。2-Me的活性部分是硫氫基,,其中一個重要作用是使血清中含硫的化合物還原成谷胱甘肽,能誘導細胞的增殖,,為非特異性的激活作用,。
同時避免過氧化物對培養(yǎng)細胞的損害。另一個重要作用是促進分裂原的反應和DNA合成,,增加植物凝集素(PHA)對淋巴細胞的轉化作用,,已廣泛應用于雜交瘤技術,另外,,也開始用于一些難以培養(yǎng)的細胞,。2-Me是一種小分子還原劑,極易氧化,。
分子量為78.13,,純的2-Me是一種無色有刺激味的液體,比重為1.110-1.120(Do20),,常用終濃度為5×10-5M,,常配制成0.1M的儲存液,用時每升培養(yǎng)液加0.5ml,。