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        一個準確的ELISA檢測實驗,，必須包含三大要素：性能可靠的試劑盒,、造模成功并準確采集的樣本,、可控環(huán)境且嚴謹實驗操作，三者缺一不可,。在操作過程中,，經(jīng)常遇到樣本稀釋問題，需要進行樣本稀釋,。

一,、在ELISA實驗過程中，超過試劑盒檢測范圍的,，一般有這幾種情況,。
    樣本值高的可能情況:
1、樣本中待測物含量過高,。一些高豐度蛋白來說,，比如免疫球蛋白,、脂聯(lián)素、C肽,、載脂蛋白等,，在樣本中本身含量就很高，有的達到mg/mL濃度,。

2,、一些受誘導(dǎo)表達的細胞上清中，大量表達,，比如小鼠細胞誘導(dǎo)后,，大量表達腫瘤壞死因子α（TNFα），小鼠胰島細胞受誘導(dǎo)后,，大量表達胰島素（INS）,。

3、在一些感染性疾病中,，大量表達,，比如乙肝表面抗原、C反應(yīng)蛋白,。

4,、疫苗原性研究時，注射疫苗的小鼠,，會產(chǎn)生大量針對疫苗的抗體,。

5、一些被濃縮的樣品,，比如重組蛋白的產(chǎn)物,，單克隆抗體純品等。

二.如何確定測定樣本的稀釋倍數(shù)呢,？樣本稀釋的原則如下：

在查詢背景知識,，或者通過預(yù)實驗，確認了樣本濃度過高,，需要進行稀釋,，就要根據(jù)以下原則，嚴謹操作和計算,。

1,、稀釋倍數(shù)合理。稀釋后樣本測定的OD值,，要求落在標準品最高值OD值的半量程內(nèi),，假定標準品最高值的OD值是2.4，那么稀釋后的樣本,，OD值接近1.2,，在這個范圍附近,，計算的濃度值最為準確，以這個結(jié)果乘以稀釋倍數(shù),，得到的樣本濃度最準確,。

2、稀釋過程規(guī)范,。特別是大倍比的稀釋,，最好是梯度稀釋。比如樣本要稀釋200倍,，就先稀釋10倍,，再在10倍稀釋的基礎(chǔ)上，再進行稀釋20倍,，得到200倍,。

3、樣本取樣量不要太小,。在樣本充足的情況下,，樣本取樣量不要低于5uL，越低的取樣量,，在混勻取樣過程中,，誤差越大。

三,、在ELISA檢測過程中,，經(jīng)常會遇到這樣的問題：

樣本測定OD值超過標曲最高點OD值，造成測定數(shù)據(jù)無法直接使用,。樣本必須進行稀釋,，如何確定測定樣本的稀釋倍數(shù)？咱們先了解下    樣本稀釋容易犯的錯誤有哪些,？

1,、稀釋不足。稀釋倍數(shù)不足時,，容易導(dǎo)致最終結(jié)果偏小,。

2、過度稀釋,。過度稀釋時，容易導(dǎo)致最終結(jié)果偏大,。

3,、稀釋不夠規(guī)范，引入很多人為偏差,。稀釋不夠規(guī)范,，特別是大比例稀釋時,，人為偏差大大增加。