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小鼠ELISA檢測試劑盒實驗中血清樣本處理過程
閱讀：111 發(fā)布時間：2024-1-2酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzymelinkedimmunosorbentassay,，ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯y(tǒng)i烯等固相載體上,，利用抗原抗體結合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法。它是應用最多的一種免疫酶技術,。ELISA試劑盒（ELISAKits）已成為藥物和植物病理學研究中的常用診斷工具,，是檢測組織提取液、血清和細胞培養(yǎng)液中目標抗體/抗原的理想工具,，也是重要的質(zhì)量控制手段,。
通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的，如血清,、血漿,、尿液、細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的,。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的第一步，下面介紹一下血清樣本的處理方法,。血清是常用于ELISA檢測的一類樣本,，處理也比較簡單。
用無熱原,、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標本,，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜，使血清析出,。（最好將試管或離心管傾斜放置,，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出,。）4℃ 1000×g離心20分鐘,，仔細收集上清。建議將血清分裝多份,，-20℃或-80℃保存,，避免反復凍融。
采血過程中應避免溶血,，因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì),，在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色，而導致檢測的不準確性,。同時也應避免細菌污染,，因為菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導致檢測的假陽性。
ELISA 實驗中血清的采集,、處理和保存：
1,、真空采血針采集 2ml 新鮮血液，加入無菌試管中；
2,、采血后室溫靜置 1 小時；
3,、將采集血液用離心機 4℃,，2500rpm 離心 10min，,，將離心好的勻漿留上清,，棄下面沉淀。
4,、取上清,。 分裝凍存?zhèn)溆茫?/p>
2-8℃下，可放置保存 24-48 小時,；
-20℃下,，可放置保存 1 個月；
-70℃下,，可放置保存 6 個月,；
5、根據(jù)你的實驗需要,，取適量上清夜進行各種 ELISA 測定,。
大部分 ELISA 檢測均以血清為標本。血清標本可按常規(guī)方法采集,，應注意避免溶血,，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以 HRP 為標記的 ELISA 測定中,，溶血標本可能會增加非特異性顯色,。此外還應避免細菌污染，因為菌體中可能含有含有內(nèi)源性 HRP,，也會產(chǎn)生假陽性反應,。血清標本宜在新鮮 時檢測。如在冰箱中保存過久,，其中的可發(fā)生聚合,，間接法 ELISA 中可使本底加深。