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細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基的方式分享
閱讀：163 發(fā)布時間：2023-10-16 目前,，血清仍是動物細(xì)胞培養(yǎng)中最基本的的添加物,，尤其是在原代培養(yǎng)或者細(xì)胞生長狀況不良時，常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),，待細(xì)胞生長旺盛以后,，再換成無血清培養(yǎng)液。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個適應(yīng)過程,，一般要逐步降低血清濃度,，從10%減少到5%，3%,，1%,，直至無血清培養(yǎng)。在降低過程中要注意觀察細(xì)胞形態(tài)是否發(fā)生變化,，是否有部分細(xì)胞死亡,，存活細(xì)胞是否還保持原有的功能和生物學(xué)特性等。在實驗后這些細(xì)胞一般不再繼續(xù)保留,，很少有細(xì)胞能夠長期培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的,。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)之前，要留有種子細(xì)胞,，種子細(xì)胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中,，以保證細(xì)胞的特性不發(fā)生變化。
為了使細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng),，關(guān)鍵的是使所培養(yǎng)細(xì)胞：
1.處于對數(shù)生長中期
2.>90%活細(xì)胞率
3.適應(yīng)時以較高的起始細(xì)胞接種
細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基的方式：
1. 直接適應(yīng)——細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中,。
一些類型細(xì)胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。對于直接適應(yīng),，接種細(xì)胞密度應(yīng)該:2.5×105~3.5×105細(xì)胞/ml,。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106~3×106細(xì)胞/ml時，傳代培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞密度在培養(yǎng)4到7天后達(dá)到2×106~4×106細(xì)胞/ml時,，細(xì)胞wan全適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基,。每隔3~5天，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106~3×106細(xì)胞/ml,，細(xì)胞活率在90％時,，貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。
2. 連續(xù)適應(yīng)——分好幾步把細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中,，與直接適應(yīng)相比較,，連續(xù)適應(yīng)趨向?qū)τ诩?xì)胞更加溫和一些。
（1）,、以2倍正常接種密度接種生長活躍的細(xì)胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基：25％SFM混合培養(yǎng)基中,，傳代培養(yǎng)。
（2）,、當(dāng)細(xì)胞密度>5×105細(xì)胞/ml時,，以2×105到3×105細(xì)胞/ml細(xì)胞密度，在有血清培養(yǎng)基：SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng),。
（3）,、以2×106到3×106細(xì)胞/ml細(xì)胞密度，25％有血清培養(yǎng)基和75%SFM中傳代培養(yǎng),。
（4）,、當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106到3×106細(xì)胞/ml（接種后4到6天）,，在100％SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng),。
（5）、每隔3到5天,，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106到3×106細(xì)胞/ml,，細(xì)胞活率在90％時，貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng),。
建議備份前一次混合培養(yǎng)的培養(yǎng)物,，直到每一次細(xì)胞適應(yīng)了新的混合培養(yǎng)基。每一次減少血清前,，可能需要在SFM/有血清混合培養(yǎng)基中進(jìn)行幾次傳代,。
在適應(yīng)過程中，不要讓細(xì)胞生長過度,。這將增加選擇亞群的可能性,。需要注意，與有血清培養(yǎng)基相比,，大部分SFM包含非常少的蛋白質(zhì),，因而更易于受外界因素的影響。