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單克隆抗體和多克隆抗體從多方面分析區(qū)別
閱讀：415 發(fā)布時間：2023-7-10抗體是我們實驗中zui 常用到的一種物質(zhì)之一,，抗體主要是分為單克隆抗體和多克隆抗體兩大類，本文從定義,、制備方式,、性質(zhì)特點及應(yīng)用上的區(qū)別對單抗和多抗進(jìn)行比較。
一,、定義上的區(qū)別
機(jī)體受抗原刺激后,，由淋巴系統(tǒng)的細(xì)胞(主要是B淋巴細(xì)胞分化后的漿細(xì)胞)產(chǎn)生具有特異性免疫功能球蛋白，即抗體,?？乖镔|(zhì)上能刺激B淋巴細(xì)胞的結(jié)構(gòu)部位叫做抗原決定簇，一個抗原具備多個抗原決定簇,，只針對一個抗原決定簇起作用的漿細(xì)胞群就是一個純系,，即一種克隆，由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體,。機(jī)體受到抗原的刺激往往會針對抗原的多個抗原決定簇相應(yīng)的產(chǎn)生多克隆抗體,，多克隆抗體能與抗原的多處抗原決定簇結(jié)合。由一種漿細(xì)胞克隆產(chǎn)生的特異性結(jié)合抗原單一抗原決定簇的抗體即為單克隆抗體,。多克隆抗體可以看作是多種單克隆抗體的混合物,。
二,、制備方式上的區(qū)別
抗體的制備，無論是單克隆抗體還是多克隆抗體,，動物的前期免疫步驟是wan全相同,，差別處在篩選這一步。
多克隆抗體由抗原免疫動物后,，從動物的血清中純化獲得,。
單克隆抗體由抗原免疫動物后，將動物的淋巴細(xì)胞與能無限增殖的骨髓瘤細(xì)胞融合,，篩選出單克隆的雜交瘤細(xì)胞,，通過ELISA篩選出能產(chǎn)高效價抗體的單克隆雜交瘤細(xì)胞，通過培養(yǎng)單克隆雜交瘤細(xì)胞即可生產(chǎn)與抗原特異性結(jié)合的單克隆抗體,。
三,、性質(zhì)上的區(qū)別
1、特異性
多克隆抗體猶如許多單克隆抗體的集合,，它們有的特異性高，有的特異性低,，總體特異性符合正態(tài)分布曲線的形式,，而其特異性的總體表現(xiàn)也應(yīng)處于統(tǒng)計學(xué)正態(tài)曲線中位線（MID）的水平。而單抗制備后續(xù)的篩選過程,，可去除大部分的非特異抗體,，保留幾株特異性較好的單克隆抗體。
一般而言,，單克隆抗體的確具有更高的特異性,。
多抗特異性可通過生產(chǎn)環(huán)節(jié)比如使用高純度的免疫原，以及使用提純的靶點蛋白對多抗進(jìn)行免疫親和層析純化等方法得以改進(jìn),。經(jīng)過免疫親和層析的多抗其總體特異性將大大提升,，與單抗相比已相差無幾。
2,、關(guān)于假陽性
根據(jù)抗體最核心的表位結(jié)合區(qū)域—互補(bǔ)決定區(qū)（Complementarity Determining Region,，CDR）的結(jié)構(gòu)，抗體通?？梢跃o密結(jié)合的抗原表面區(qū)域或表位面積很小,，對于變性的肽段約在4-8個Aa以內(nèi)，以及5-7個單糖的糖鏈或6-8個核苷酸的核酸,。通過肽段BLAST可以得知,，小肽段序列wan 全相同的情況將在很多不同蛋白上發(fā)生。這意味著單抗識別的這個表位可能并不僅僅屬于靶標(biāo)蛋白本身,，也即意味著,，即使利用純化抗原蛋白進(jìn)行了特異性篩選的單克隆抗體,，當(dāng)用其檢測復(fù)雜樣本時，也將面臨交叉反應(yīng)或假陽性問題,。
3,、靈敏度
特異性決定了假陽性結(jié)果的多少，敏感性決定了檢出率的高低,。在復(fù)雜樣本中,，由于多克隆抗體識別抗原的多個表位，可以在一個抗原分子上結(jié)合更多的抗體分子,，也可以在當(dāng)部分抗原表位受到一定程度的遮蓋或破壞時,，仍有抗體結(jié)合在未受影響的表位上。這種情況常發(fā)生在如石蠟包埋的免疫組化（IHC-P）等實驗中,，當(dāng)樣本經(jīng)甲醛交聯(lián)固定后,，即使經(jīng)過抗原修復(fù)，抗原表位也不可避免地受到了影響,，此時單克隆抗體由于只識別一個表位,，結(jié)合能力可能大大降低甚至呈現(xiàn)陰性結(jié)果，而只要不是所有表位都受到了破壞,，多抗仍可以獲得該靶點的陽性結(jié)果,。同樣的，對于樣本中一些表達(dá)豐度極低的蛋白,，由于多表位結(jié)合更多抗體分子,，檢測信號就將被放大。因此,，使用多抗具有靈敏度和檢出率上的優(yōu)勢,。