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  試劑顯色時(shí) A,、B 液按順序加入且間隔不超過 10min,，如先將兩液混合再加樣則需保證等體積混合,。顯色劑不宜過多，注意避光反應(yīng),。顯色是最后一步溫育反應(yīng),，酶將無(wú)色底物催化反應(yīng)呈有色，反應(yīng)的溫度和時(shí)間均為影響結(jié)果的重要因素,，目前市場(chǎng)上大多數(shù)進(jìn)口的 ELISA 檢測(cè)顯色溫度處于 18~30℃,。  一定時(shí)間內(nèi)，陰性孔可保持無(wú)色,，但陽(yáng)性孔會(huì)隨時(shí)間的延長(zhǎng)而顯色加強(qiáng),。研究表明，顯色溫度對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有明顯影響,，顯色溫度不同,，試劑最di檢測(cè)能力差距非常大，溫度低于 21℃時(shí)試劑盒對(duì)于質(zhì)控物的檢出能力下降,，溫度過低導(dǎo)致結(jié)合反應(yīng)速率變慢,，顯色不充分，造成低值陽(yáng)性結(jié)果的漏檢,，所以操作中應(yīng)嚴(yán)格控制溫度,。顯色時(shí)間不宜過短，因?yàn)橐恍┑偷味瓤赡懿荒芗皶r(shí)出現(xiàn)反應(yīng),，造成假陰性結(jié)果,。結(jié)果判斷應(yīng)按照說明書在規(guī)定時(shí)間內(nèi)完成，研究報(bào)道終止反應(yīng)后的時(shí)間對(duì) OD 值結(jié)果有明顯影響,，10~15min陽(yáng)性結(jié)果 OD 值逐漸下降,，陰性結(jié)果的 OD 值有所上升，所以必須嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行,，薛春楊等認(rèn)為結(jié)果判斷需在加入終止液后 10min 內(nèi)完成,，避免出現(xiàn)孔內(nèi)結(jié)晶影響酶標(biāo)儀的測(cè)試，避免強(qiáng)光下進(jìn)行,。

  在加液和混合過程中產(chǎn)生氣泡,、微孔條底部不透明、帶水滴,、有劃痕及不規(guī)則的表面都可能引起吸光值的升高,，易造成假陽(yáng)性結(jié)果，若顯色但酶標(biāo)儀讀值為陰性的灰色值樣區(qū)的樣本不管其是否來(lái)源于高危人群均需復(fù)檢并參考參比試劑。