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原代細胞的培養(yǎng)基本條件
閱讀:437 發(fā)布時間:2023-3-20原代細胞培養(yǎng)是將機體內(nèi)的某組織取出,分散成單細胞,,在人工條件下培養(yǎng)使其生存并不斷生長,、繁殖的方法。借助這種方法可以觀察細胞的分裂繁殖,、細胞的接觸抑制、以及細胞的衰老,,死亡等生命現(xiàn)象,。 原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細胞要通過充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性;
2,、細胞接種時濃度要稍大一些,,至少為5×108細胞/L;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4、 胎牛血清濃度為10%-80%,;
5,、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,,漂浮,;
7,、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應將原代細胞換液,;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二,、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞,;
2,、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行,;
3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進行分瓶試驗,;
4,、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,,以利細胞生長;
5,、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快,、細胞密度較高時才能進行,。