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   抗體(antibody)免疫細(xì)胞分泌免疫物質(zhì),，是哺乳動(dòng)物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)對抗病原體的核心,，它是在病原體刺激下由漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）所分泌的一種免疫球蛋白，能夠識別并結(jié)合特異的病原體抗原,，隨后通過介導(dǎo)中和作用,、調(diào)理作用、效應(yīng)T細(xì)胞殺傷等來清除病原體,。隨著抗體制備與改造技術(shù)的飛速發(fā)展,，抗體已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)各個(gè)領(lǐng)域，包括科學(xué)研究,、診斷,、治療等。

  特異性（specificity）的本質(zhì)含義是“Connected with one particular thing only"即只與唯yi的特定事物相關(guān),，具有專一性,。在免疫學(xué)上我們會說“抗體具有特異性"，指的就是抗體具有專一性,，某一特定的抗體只能與唯yi 一種抗原結(jié)合,。其實(shí)準(zhǔn)確來講是一類具有特定抗原表位的抗原，因?yàn)槟承┎煌目乖哂邢嗤目乖砦唬ǚQ為交叉抗原）,，也可與同一種抗體特異性結(jié)合,。科研工作離不開抗體，WB,、IP,、IHC、IF,、ChIP和FC都需要用到抗體,，這幾種實(shí)驗(yàn)方法中的抗體特異性選擇需要考慮的要點(diǎn)了解下，特異性的選擇主要需要考慮四個(gè)方面：蛋白特異性,、種屬特異性,、實(shí)驗(yàn)方法特異性、標(biāo)記物的特異性,。

 

1.蛋白特異性

針對需要檢測的蛋白查找抗體,，幾個(gè)細(xì)節(jié)要區(qū)分：

a.重組蛋白如果不是全長表達(dá)，則需要注意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi),。

b.內(nèi)源性蛋白好能清楚其剪切與修飾的方式,，特殊表型的蛋白需要進(jìn)行序列比對，并結(jié)合抗體免疫原序列,，查看交叉反應(yīng)的情況,。

c.磷酸化蛋白檢測需要確定具體位點(diǎn)，不同位點(diǎn)的磷酸化意味著可能有不同的機(jī)制存在,，不宜一概而論,。

 

2.種屬特異性

同種蛋白不同物種，有著或大或小的差異,。

a.目前大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或設(shè)計(jì)多肽抗原的,，根據(jù)蛋白的同源性的情況與其他種屬發(fā)生交叉反應(yīng)。需要參照說明書注明的可反應(yīng)種屬信息,。

b.一些稀有種屬很難找到抗體,，可以通過蛋白的序列比對，選擇同源序列免疫的抗體,，不過一般這種情況商不會受理其關(guān)于質(zhì)量的申訴,，如果可以申請到免費(fèi)的抗體樣品，則利于抗體選擇,。

 

3.實(shí)驗(yàn)方法特異性

目前使用抗體的實(shí)驗(yàn)方法有很多,，不同的使用方法過程中，因?yàn)閷Φ鞍讟悠返奶幚矸绞讲灰粯?，蛋白的含量有差異，對抗體的識別表位和效價(jià)要求都是不一樣的,。

 

4.標(biāo)記物的特異性

一般基于實(shí)驗(yàn)操作的實(shí)驗(yàn)方法不會使用帶有標(biāo)記的一抗,，比如 WB、IHC 等，都是通過二抗類的試劑標(biāo)記達(dá)到結(jié)果呈現(xiàn)的目的,。但是基于儀器分析的一些實(shí)驗(yàn),，可能就會使用到直接標(biāo)記的一抗，比如流式實(shí)驗(yàn),。那么需要了解到自己將要使用的儀器能檢測到的熒光范圍,，針對不通的參數(shù)要求選擇對應(yīng)的標(biāo)記物。在免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中,，需要選配不同的熒光標(biāo)記物,。