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介紹抗體的保存
閱讀：456 發(fā)布時(shí)間：2022-8-1抗體的保存方法一般會(huì)直接影響抗體的活性和使用效果,。在保存得當(dāng)?shù)那闆r下，大部分抗體可以存放數(shù)月甚至數(shù)年,，一般情況需嚴(yán)格按照抗體說明書來進(jìn)行保存,。
一、抗體保存溫度和條件：
1,、 抗體收到后,，需在12000rpm離心1~5分鐘，再打開管蓋進(jìn)行分裝和保存,，如果抗體體積不足50 ul,，可延長離心時(shí)間至 5 分鐘，從而確保抗體全部離心下來,。
2,、對(duì)于多數(shù)抗體而言，分裝成小等份并凍存于-20℃或-80℃是不錯(cuò)之選,。腹水形式的產(chǎn)品收到后需立即凍存,，因?yàn)樵擃惍a(chǎn)品含有大量的蛋白酶，長期在置于4℃條件會(huì)導(dǎo)致抗體的降解,。
分裝成小等份可最da程度減少由凍融造成的損傷,，以及從單個(gè)試劑瓶中多次吸取而引入的污染。
小等份只需凍融一次,，如有剩余，可將剩余物保存于4℃,。小等份的量取決于實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)中通常采用的量,。小等份應(yīng)不小于10μl；等份越小,，儲(chǔ)液濃度因抗體蒸發(fā)及吸附于保存瓶表面而受到的影響越大,。
抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完，在4℃盡量不要超過1天,。
3,、抗體的運(yùn)輸：一般選擇4℃運(yùn)輸，避免了反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害,；如若選擇干冰運(yùn)輸,，收到抗體是冰凍的，分裝時(shí)解凍,，會(huì)增加一次凍融的過程,，所以運(yùn)輸過程中盡量避免干冰運(yùn)輸。
特殊抗體保存條件：
酶聯(lián)抗體：保存在4℃,，避免凍存以降低或喪失酶活性,；
偶聯(lián)抗體：需保存在棕色管或是用錫箔紙避光于4℃保存，熒光抗體對(duì)光敏感,，操作時(shí)應(yīng)嚴(yán)格避光,；
IgG3的同型對(duì)照：保存于4℃避免凍存，反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體變性,，形成多聚體,；
二、抗體保存注意事項(xiàng)：
1,、 加入甘油：對(duì)于大多數(shù)抗體,，可加入50%的甘油來避免反復(fù)凍融。甘油在-20℃可降低冰點(diǎn)，但不建議加入甘油的抗體保存于-80℃,，該溫度已經(jīng)超過了甘油的冰點(diǎn),；
2、 加蛋白保護(hù)劑：蛋白在高濃度時(shí)不易降解,，正如有些抗體會(huì)加入BSA作為穩(wěn)定劑的原因,，同時(shí)加入蛋白也可減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標(biāo)記的話,，則不能加入蛋白穩(wěn)定劑,，因?yàn)檫@些穩(wěn)定劑會(huì)和抗體一起競爭結(jié)合標(biāo)記物。
3,、加入疊氮化na：為了防止微生物污染,，經(jīng)常選擇加入疊氮化na到抗體中（終濃度 0.02% (w/v)）。但在下述情況中不能使用疊氮化na：
1）,、抗體用于染色或處理活細(xì)胞,，用于體內(nèi)研究。疊氮化na在抵抗微生物的同時(shí),，對(duì)其它大部分有機(jī)物也是有毒的,，因?yàn)樗钄嗔司€粒體的 細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng)cytochrome electron transportsystem。
2）,、要偶聯(lián)帶有氨基的抗體,。疊氮化na會(huì)干擾任何含有氨基的偶聯(lián)，因此在進(jìn)行偶聯(lián)之前,，應(yīng)將疊氮化na去除,。偶聯(lián)后的抗體可以加入疊氮化na保存，但是濃度只能是0.01％,。對(duì)于需要偶聯(lián)的抗體,，硫柳汞 (merthiolate)可以替代疊氮化na作為保護(hù)劑。
此外,，如果需要去除疊氮化na,，可以通過凝膠電泳或過濾的方式（IgG 的分子量是 150kDa，疊氮化na的分子量只有65Da）,，使用cut off 14kDa的濾膜即可將疊氮化na從抗體中去除,。