技術(shù)文章
介紹抗體的保存
閱讀:501 發(fā)布時間:2022-8-1抗體的保存方法一般會直接影響抗體的活性和使用效果。在保存得當?shù)那闆r下,,大部分抗體可以存放數(shù)月甚至數(shù)年,一般情況需嚴格按照抗體說明書來進行保存,。
一,、抗體保存溫度和條件:
1、 抗體收到后,,需在12000rpm離心1~5分鐘,,再打開管蓋進行分裝和保存,如果抗體體積不足50 ul,,可延長離心時間至 5 分鐘,,從而確保抗體全部離心下來,。
2,、對于多數(shù)抗體而言,分裝成小等份并凍存于-20℃或-80℃是不錯之選,。腹水形式的產(chǎn)品收到后需立即凍存,,因為該類產(chǎn)品含有大量的蛋白酶,長期在置于4℃條件會導致抗體的降解,。
分裝成小等份可最da程度減少由凍融造成的損傷,,以及從單個試劑瓶中多次吸取而引入的污染。
小等份只需凍融一次,,如有剩余,,可將剩余物保存于4℃,。小等份的量取決于實驗人員在實驗中通常采用的量。小等份應不小于10μl,;等份越小,,儲液濃度因抗體蒸發(fā)及吸附于保存瓶表面而受到的影響越大。
抗體工作液應該當天配制當天用完,,在4℃盡量不要超過1天,。
3、抗體的運輸:一般選擇4℃運輸,,避免了反復凍融對抗體活性的損害;如若選擇干冰運輸,,收到抗體是冰凍的,,分裝時解凍,會增加一次凍融的過程,,所以運輸過程中盡量避免干冰運輸,。
特殊抗體保存條件:
酶聯(lián)抗體:保存在4℃,避免凍存以降低或喪失酶活性,;
偶聯(lián)抗體:需保存在棕色管或是用錫箔紙避光于4℃保存,,熒光抗體對光敏感,操作時應嚴格避光,;
IgG3的同型對照:保存于4℃避免凍存,,反復凍融會導致抗體變性,形成多聚體,;
二,、抗體保存注意事項:
1、 加入甘油:對于大多數(shù)抗體,,可加入50%的甘油來避免反復凍融,。甘油在-20℃可降低冰點,但不建議加入甘油的抗體保存于-80℃,,該溫度已經(jīng)超過了甘油的冰點,;
2、 加蛋白保護劑:蛋白在高濃度時不易降解,,正如有些抗體會加入BSA作為穩(wěn)定劑的原因,,同時加入蛋白也可減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標記的話,,則不能加入蛋白穩(wěn)定劑,,因為這些穩(wěn)定劑會和抗體一起競爭結(jié)合標記物。
3,、加入疊氮化na:為了防止微生物污染,,經(jīng)常選擇加入疊氮化na到抗體中(終濃度 0.02% (w/v)),。但在下述情況中不能使用疊氮化na:
1)、抗體用于染色或處理活細胞,,用于體內(nèi)研究,。疊氮化na在抵抗微生物的同時,對其它大部分有機物也是有毒的,,因為它阻斷了線粒體的 細胞色素電子傳遞系統(tǒng)cytochrome electron transportsystem,。
2)、要偶聯(lián)帶有氨基的抗體,。疊氮化na會干擾任何含有氨基的偶聯(lián),,因此在進行偶聯(lián)之前,應將疊氮化na去除,。偶聯(lián)后的抗體可以加入疊氮化na保存,,但是濃度只能是0.01%。對于需要偶聯(lián)的抗體,,硫柳汞 (merthiolate)可以替代疊氮化na作為保護劑,。
此外,如果需要去除疊氮化na,,可以通過凝膠電泳或過濾的方式(IgG 的分子量是 150kDa,,疊氮化na的分子量只有65Da),使用cut off 14kDa的濾膜即可將疊氮化na從抗體中去除,。