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PCR對照試驗一般都會加陰性對照,，陽性對照,。如果你只想檢控PCR操作及擴(kuò)增，就加水作為陰性對照,，陽性質(zhì)?；蛘逥NA作為陽性對照。
如果你想監(jiān)控整個核酸提取過程,，及PCR過程的話,，那就從核酸提取開始，就將水作為陰性樣本做對照,，含模板DNA的菌或者病毒或者組織作為陽性對照,。然而,，PCR對照試驗結(jié)果好卻沒回收到目的片段參考見解：

　　1,、 連接用室溫保溫1小時,，能滿足大多數(shù)克隆，為提高效率,，需4oC過夜,。

　　2、 插入片段帶有污染,，使3`-T缺失,，或抑制連接，抑制轉(zhuǎn)化,。為此,，將插入片段和pGEM-T正對照混合，再連接,。如降低了對照的菌落數(shù),，插入片段需純化，或重新制備,。如產(chǎn)生大量的藍(lán)斑,，插入片段污染有核酸酶，使pGEM-T或pGEM-T Easy載體3`-T缺失,。

　　3,、插入片段不適于連接。用凝膠純化的插入片段,，因受UV過度照射,，時有發(fā)生。UV過度照射會產(chǎn)生嘧啶二聚體,，不利于連接,，DNA必需重新純化。

　　4,、 帶有修復(fù)功能的耐熱DNA聚合酶的擴(kuò)增產(chǎn)物末端無A,，后者是pGEM-T或pGEM-T Easy載體克隆所需。加Taq DNA聚合酶和核苷酸可在末端加A,。詳情查pGEM-T pGEM-T Easy載體技術(shù)資料（TM042）,。

　　5、高度重復(fù)序列可能會不穩(wěn)定,，在擴(kuò)增中產(chǎn)生缺失和重排,，如發(fā)現(xiàn)插入片段高頻率地產(chǎn)生缺失和重排，需用重組缺陷大腸桿菌菌株,，如SURE細(xì)胞