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懸浮細胞的凍存：

1. 直接將細胞收集到離心管,。

2. 200g 離心5min,，棄上清。

3. 以生長培養(yǎng)基（含20%胎牛血清）或100%胎牛血清重懸細胞至終濃度約107/ml,，加入10%的DMSO,。

4. 以每管1ml分裝至凍存管中。

5. 置于4oC 30 min,，再轉(zhuǎn)入-20℃ 2h后,，再放入-80℃冰箱冷凍過夜,，次日保存到液氮罐中；或置于程序降溫盒中,，按相關(guān)的操作指南進行操作,。

液氮罐使用注意事項：

1．初次使用前檢查容器內(nèi)膽是否清潔干燥，外部有無凹陷及嚴重碰傷,，如有輕微凹陷及碰傷,，經(jīng)試驗其蒸發(fā)性能不變，仍可繼續(xù)使用,，如性能下降,，應停止使用，避免經(jīng)濟損失,。

2．液氮容器應放在陰涼干燥處,，應有良好的通風，不應放置在靠近熱源,，陽光直照,，以及風口處，嚴禁放置液氮容器的房間緊閉門窗,，以免室內(nèi)因液氮蒸發(fā)使氧氣含量下降,，造成呼吸困難。

3．只能用于充裝液氮,，凍存細胞和病毒用,，嚴禁充裝液氧等易燃易爆及腐蝕性液體，以免產(chǎn)生猛烈燃燒,、爆炸或?qū)θ萜鳟a(chǎn)生腐蝕,。  液氮是超低溫液體（-196℃），在充裝時,，要穿長袖工作服,、帶皮手套，以避免液氮飛濺造成凍傷,。  貯存容器不得作貯運容器使用,。若運輸液氮。必須使用B型貯運容器,。因此類容器有特殊支撐結(jié)構(gòu),堅固可靠不易損壞。

4．液氮容器在使用過程中,，每天都應隨時檢查容器的使用情況,，如發(fā)現(xiàn)容器瓶蓋上和上部有水珠或結(jié)霜情況，說明容器質(zhì)量出現(xiàn)問題,，應立即停止使用,。

5．存入取出樣品要標記,，拿取東西要輕拿輕放。