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懸浮細(xì)胞的凍存：

1. 直接將細(xì)胞收集到離心管。

2. 200g 離心5min,，棄上清,。

3. 以生長(zhǎng)培養(yǎng)基（含20%胎牛血清）或100%胎牛血清重懸細(xì)胞至終濃度約107/ml，加入10%的DMSO,。

4. 以每管1ml分裝至凍存管中,。

5. 置于4oC 30 min，再轉(zhuǎn)入-20℃ 2h后,，再放入-80℃冰箱冷凍過夜,，次日保存到液氮罐中；或置于程序降溫盒中，按相關(guān)的操作指南進(jìn)行操作,。

液氮罐使用注意事項(xiàng)：

1．初次使用前檢查容器內(nèi)膽是否清潔干燥,，外部有無凹陷及嚴(yán)重碰傷，如有輕微凹陷及碰傷,，經(jīng)試驗(yàn)其蒸發(fā)性能不變,，仍可繼續(xù)使用，如性能下降,，應(yīng)停止使用,，避免經(jīng)濟(jì)損失。

2．液氮容器應(yīng)放在陰涼干燥處,，應(yīng)有良好的通風(fēng),，不應(yīng)放置在靠近熱源，陽(yáng)光直照,，以及風(fēng)口處,，嚴(yán)禁放置液氮容器的房間緊閉門窗，以免室內(nèi)因液氮蒸發(fā)使氧氣含量下降,，造成呼吸困難,。

3．只能用于充裝液氮，凍存細(xì)胞和病毒用,，嚴(yán)禁充裝液氧等易燃易爆及腐蝕性液體,，以免產(chǎn)生猛烈燃燒、爆炸或?qū)θ萜鳟a(chǎn)生腐蝕,。  液氮是超低溫液體（-196℃）,，在充裝時(shí)，要穿長(zhǎng)袖工作服,、帶皮手套,，以避免液氮飛濺造成凍傷。  貯存容器不得作貯運(yùn)容器使用,。若運(yùn)輸液氮,。必須使用B型貯運(yùn)容器。因此類容器有特殊支撐結(jié)構(gòu),堅(jiān)固可靠不易損壞,。

4．液氮容器在使用過程中,，每天都應(yīng)隨時(shí)檢查容器的使用情況，如發(fā)現(xiàn)容器瓶蓋上和上部有水珠或結(jié)霜情況,，說明容器質(zhì)量出現(xiàn)問題,，應(yīng)立即停止使用。

5．存入取出樣品要標(biāo)記,，拿取東西要輕拿輕放。