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PCR三個(gè)基本反應(yīng)步驟
閱讀：5256 發(fā)布時(shí)間：2022-4-6聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù),，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加,。PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物,。
PCR由變性-退火-延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：
模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后,，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈,，以便它與引物結(jié)合,，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；
模板DNA與引物的退火（復(fù)性）：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,，溫度降至55℃左右,，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合；
引物的延伸：DNA模板-引物結(jié)合物在72℃,、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下,，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板,，按堿基互補(bǔ)配對與半保留復(fù)制原理,，合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。
重復(fù)循環(huán)變性-退火-延伸三過程就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈",，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板,。每完成一個(gè)循環(huán)需2～4分鐘，2～3小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍,。