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混和培養(yǎng)物分離純化主要六種方法
閱讀：1531 發(fā)布時(shí)間：2022-2-15含有一種以上的微生物培養(yǎng)物稱為混和培養(yǎng)物（mixed culture）,。如果在一個(gè)菌落中所有細(xì)胞均來自于一個(gè)親代細(xì)胞，那么這個(gè)菌落稱為純培養(yǎng)（pureculture）,。在進(jìn)行菌種鑒定時(shí),，所用的微生物一般均要求為純的培養(yǎng)物。得到純培養(yǎng)的過程稱為分離純化,，主要方法有以下六種,。
１、傾注平板法
首先把微生物懸液通過一系列稀釋,，取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40-50°左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基充分混合,，然后把這混合液傾注到無菌的培養(yǎng)皿中，待凝固之后,，把這平板倒置在恒箱中培養(yǎng),。單一細(xì)胞經(jīng)過多次增殖后形成一個(gè)菌落，取單個(gè)菌落制成懸液,，重復(fù)上述步驟數(shù)次,，便可得到純培養(yǎng)物。
２,、涂布平板法
首先把微生物懸液通過適當(dāng)?shù)南♂?，取一定量的稀釋液放在無菌的已經(jīng)凝固的營養(yǎng)瓊脂平板上，然后用無菌的玻璃刮刀把稀釋液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面上，經(jīng)恒溫培養(yǎng)便可以得到單個(gè)菌落,。
３,、平板劃線法
zui 簡單的分離微生物的方法是平板劃線法。用無菌的接種環(huán)取培養(yǎng)物少許在平板上進(jìn)行劃線,。劃線的方法很多,，常見的比較容易出現(xiàn)單個(gè)菌落的劃線方法有斜線法、曲線法,、方格法,、放射法、四格法等,。當(dāng)接種環(huán)在培養(yǎng)基表面上往后移動(dòng)時(shí),，接種環(huán)上的菌液逐漸稀釋，最后在所劃的線上分散著單個(gè)細(xì)胞,，經(jīng)培養(yǎng),，每一個(gè)細(xì)胞長成一個(gè)菌落。
４,、富集培養(yǎng)法
富集培養(yǎng)法的方法和原理非常簡單,。我們可以創(chuàng)造一些條件只讓所需的微生物生長，在這些條件下,，所需要的微生物能有效地與其他微生物進(jìn)行競爭,，在生長能力方面超過其他微生物。如果要分離一些專性寄生菌,，就必須把樣品接種到相應(yīng)敏感宿主細(xì)胞群體中,，使其大量生長。通過多次重復(fù)移種便可以得到純的寄生菌,。
５,、厭氧法
在實(shí)驗(yàn)室中，為了分離某些厭氧菌,，可以利用裝有原培養(yǎng)基的試管作為培養(yǎng)容器,，把這支試管放在沸水浴中加熱數(shù)分鐘，以便逐出培養(yǎng)基中的溶解氧,。然后快速冷卻,，并進(jìn)行接種。接種后,，加入無菌的石蠟于培養(yǎng)基表面,，使培養(yǎng)基與空氣隔絕。另一種方法是,，在接種后,，利用N2或CO2取代培養(yǎng)基中的氣體,，然后在火焰上把試管口密封,。有時(shí)為了更有效地分離某些厭氧菌,，可以把所分離的樣品接種于培養(yǎng)基上，然后再把培養(yǎng)皿放在*密封的厭氧培養(yǎng)裝置中,。
6,、單細(xì)胞（或單孢子）分離法
是采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個(gè)細(xì)胞或單個(gè)個(gè)體進(jìn)行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)。較大的微生物,，可采用毛細(xì)管提取單個(gè)個(gè)體,。個(gè)體相對(duì)較小的微生物，需采用顯微操作儀,，在顯微鏡下用毛細(xì)管或顯微針,、鉤、環(huán)等挑取單個(gè)微生物細(xì)胞或孢子以獲得純培養(yǎng),。單細(xì)胞分離法對(duì)操作技術(shù)有比較高的要求,。