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溶解與稀釋ELISA標(biāo)準(zhǔn)品方法步驟
閱讀:1193 發(fā)布時(shí)間:2021-10-20ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡(jiǎn)稱,,是一種檢測(cè)方法,而標(biāo)準(zhǔn)品是相對(duì)于具體的物質(zhì)有具體的標(biāo)準(zhǔn)品,,所以不存在說ELISA的標(biāo)準(zhǔn)品,。ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線是結(jié)果計(jì)算的尺子,標(biāo)準(zhǔn)品是ELISA 實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵點(diǎn),。正確溶解,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品如下:
1. 粉末標(biāo)準(zhǔn)品短暫離心,讓因運(yùn)輸沾到管蓋,、管壁的標(biāo)準(zhǔn)品沉到管底,。
2. 根據(jù)瓶標(biāo)簽加入一定體積的蒸餾水,加水后輕柔渦旋震蕩,,室溫靜置溶解 10-30min,,讓粉末*溶解。
注意:加水后暫不用移液槍吹吸,,避免蛋白未溶解,,槍頭帶出部分蛋白,待*溶解后可吹吸或渦旋振蕩混勻,。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋:
(1)標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的選擇:
若血清,、血漿、組織勻漿樣本,,用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,,梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
若細(xì)胞上清樣本,,建議用細(xì)胞培養(yǎng)基梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品,。
(2)耗材準(zhǔn)備:準(zhǔn)備8個(gè)1.5Ml離心管,寫上S1-S7,、空白,。
(3)梯度稀釋:根據(jù)說明書,每管加入等體積的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(培養(yǎng)基),。吸取同體積溶解好的標(biāo)準(zhǔn)品到S1管中,,吹打10次混勻,渦旋5S,。從S1管中吸取同體積溶液到 S2管,,吹打10次混勻,渦旋5s,。同法稀釋S3-S7濃度,。
(4)空白: 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(培養(yǎng)基)作為空白即零濃度,。
注意:梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品時(shí),渦旋震蕩混勻后可短暫離心,,讓到蓋子,、壁上的液體到管底,再開始稀釋下個(gè)濃度,。