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溶解與稀釋ELISA標(biāo)準(zhǔn)品方法步驟
閱讀:1130 發(fā)布時間:2021-10-20ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱,,是一種檢測方法,而標(biāo)準(zhǔn)品是相對于具體的物質(zhì)有具體的標(biāo)準(zhǔn)品,,所以不存在說ELISA的標(biāo)準(zhǔn)品。ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線是結(jié)果計算的尺子,,標(biāo)準(zhǔn)品是ELISA 實驗成功與否的關(guān)鍵點,。正確溶解、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品如下:
1. 粉末標(biāo)準(zhǔn)品短暫離心,,讓因運(yùn)輸沾到管蓋、管壁的標(biāo)準(zhǔn)品沉到管底,。
2. 根據(jù)瓶標(biāo)簽加入一定體積的蒸餾水,,加水后輕柔渦旋震蕩,室溫靜置溶解 10-30min,,讓粉末*溶解,。
注意:加水后暫不用移液槍吹吸,,避免蛋白未溶解,槍頭帶出部分蛋白,,待*溶解后可吹吸或渦旋振蕩混勻,。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋:
(1)標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的選擇:
若血清、血漿,、組織勻漿樣本,用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,,梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品,。
若細(xì)胞上清樣本,建議用細(xì)胞培養(yǎng)基梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品,。
(2)耗材準(zhǔn)備:準(zhǔn)備8個1.5Ml離心管,,寫上S1-S7,、空白,。
(3)梯度稀釋:根據(jù)說明書,,每管加入等體積的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(培養(yǎng)基)。吸取同體積溶解好的標(biāo)準(zhǔn)品到S1管中,,吹打10次混勻,,渦旋5S。從S1管中吸取同體積溶液到 S2管,,吹打10次混勻,,渦旋5s。同法稀釋S3-S7濃度,。
(4)空白: 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(培養(yǎng)基)作為空白即零濃度。
注意:梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品時,,渦旋震蕩混勻后可短暫離心,,讓到蓋子、壁上的液體到管底,,再開始稀釋下個濃度,。