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組織培養(yǎng)消除污染的實驗步驟
閱讀:316 發(fā)布時間:2021-10-11當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時,研究者可能試圖消除或控制污染,。
首先,,確定污染物是細(xì)菌、真菌,、支原體或酵母,,把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺,,檢查HEPA過濾器,。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細(xì)胞系有毒性,因而,,做劑量反應(yīng)實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平,。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。
下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟:
(1)在無抗生素的培養(yǎng)基中消化,、計數(shù)和稀釋細(xì)胞,,稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。
(2)分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,,或幾個小培養(yǎng)瓶中,。在一個濃度梯度范圍內(nèi),把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,,兩性霉素B推薦下列濃度,,0.25,0.50,,1.0,,2.0,4.0,,8.0 mg/ml,。
(3)每天觀測細(xì)胞毒性指標(biāo),如脫落,,出現(xiàn)空泡,,匯合度下降和變圓。
(4)確定抗生素毒性水平后,,使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2-3代,。
(5)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。
(6)重復(fù)步驟4,。
(7)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代,,確定污染是否已被消除。