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組織培養(yǎng)消除污染的實(shí)驗(yàn)步驟
閱讀:343 發(fā)布時(shí)間:2021-10-11當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時(shí),研究者可能試圖消除或控制污染,。
首先,,確定污染物是細(xì)菌、真菌,、支原體或酵母,,把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開,用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái),,檢查HEPA過濾器,。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對(duì)一些細(xì)胞系有毒性,因而,,做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平,。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時(shí)尤其重要。
下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟:
(1)在無抗生素的培養(yǎng)基中消化,、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞,,稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。
(2)分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,,或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中,。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi),把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中,。例如,,兩性霉素B推薦下列濃度,0.25,,0.50,,1.0,2.0,,4.0,,8.0 mg/ml。
(3)每天觀測(cè)細(xì)胞毒性指標(biāo),,如脫落,,出現(xiàn)空泡,匯合度下降和變圓,。
(4)確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2-3代,。
(5)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代,。
(6)重復(fù)步驟4。
(7)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代,,確定污染是否已被消除,。