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培養(yǎng)基制備常用的8個(gè)步驟過(guò)程
閱讀：58228 發(fā)布時(shí)間：2021-8-25培養(yǎng)基(Medium)是供微生物,、植物組織和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料,，一般都含有碳水化合物,、含氮物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽(包括微量元素)以及維生素和水等,。不同培養(yǎng)基可根據(jù)實(shí)際需要,，添加一些自身無(wú)法合成的化合物，即生長(zhǎng)因子,。培養(yǎng)基的制備程序不同類型培養(yǎng)基制備的程序也不盡相同,。但一般培養(yǎng)基的程序主要可分為：配料、溶化,、矯正pH,、澄清過(guò)濾、分裝,、滅菌及檢定等8個(gè)步驟,。
1，配料：按培養(yǎng)基處方準(zhǔn)確稱取各種成分,，先在三角燒瓶中加入少量蒸餾水,，再加入各種成分,，以防蛋白胨等粘附于瓶底，然后再以剩余的水沖洗瓶壁,。
2,，溶化：將各種成分混勻于水中，*以流通蒸氣溶化半小時(shí),，如在電爐上溶化應(yīng)隨時(shí)攪拌,，如有瓊脂成分時(shí)geng應(yīng)注意防止外溢。溶化完畢,，補(bǔ)足失去的水分,。
3，矯正pH：pH測(cè)定,，取與標(biāo)準(zhǔn)管同口徑的試管（通常用華氏試管）3支,，于第1、3管各加入欲測(cè)定pH的的培養(yǎng)基5ml,，并于第1管中加入0.2g／L的酚紅0.25ml作為測(cè)定管,，混勻醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理；于第2管加入蒸餾水5ml,，第4管為pH標(biāo)準(zhǔn)比色管,。 pH的校正,，若測(cè)定管過(guò)酸或過(guò)堿可用0.1mol／L氫氧-化鈉或0.1mol／L鹽酸溶液矯正,，直至顏色與標(biāo)準(zhǔn)管相同為止，加堿或加酸時(shí)要精-確緩慢,，每加1滴后要充分混勻,，比色后再加第2滴（有時(shí)僅加半滴）準(zhǔn)確記錄加入的量。 計(jì)算,，設(shè)5ml培養(yǎng)基矯正pH至7.4時(shí)需0.1mol／L氫氧-化鈉0.15ml,，現(xiàn)有培養(yǎng)基4990ml，需加氫氧-化鈉的量可按下列方法計(jì)算：5∶4990＝0.15∶X X＝0.15×4990/5＝149.7（ml）,，如將此0.1mol／L的氫氧-化鈉改用1mol／L的氫氧-化鈉時(shí),，則需14.9ml即可。
4,，過(guò)濾澄清：培養(yǎng)基配制后一般都有沉渣或混濁出現(xiàn),，需過(guò)濾成清晰透明后方可使用，常用的過(guò)濾方法如下：
液體培養(yǎng)基必須清晰,，以便觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)情況,，常用濾紙過(guò)濾，亦可在加熱前加入用水稀釋的雞蛋白（1000ml培養(yǎng)基用1個(gè)雞蛋白）在100℃加熱后保持60～70℃40～60分鐘,，使其不溶性物質(zhì)附于凝固的蛋白上而沉淀,，然后再用虹吸法吸出上清液或以濾紙過(guò)濾,。固體培養(yǎng)基如系瓊脂培養(yǎng)基，于加熱融化后需趁熱以絨布或兩層紗布中夾脫脂棉過(guò)濾,；亦可用
自然沉淀法,，即將瓊脂培養(yǎng)基盛人鋁鍋或廣口搪瓷容器內(nèi)，以高壓（103.43kPa）蒸汽融化15分鐘后,，靜置高壓鍋內(nèi)過(guò)夜,，次日將瓊脂傾出，用刀將底部沉渣切去,，再融化即可收清晰的瓊脂培養(yǎng)基,。
5，分裝：根據(jù)需要將培養(yǎng)基分裝于不同容量的三角燒瓶,、試管中,。分裝的量不宜超過(guò)容器的2／3以免滅菌時(shí)外溢。瓊脂斜面分裝量為試管容量的1／5,，滅菌后須趁熱放置成斜面,，斜面長(zhǎng)約為試管長(zhǎng)的2／3。半固體培養(yǎng)基分裝量約為試管長(zhǎng)的1／3,，滅菌后直立凝固待用,。高層瓊脂分裝量約為試管的1／3，滅菌后趁熱直立,，待冷后凝固待用,。液體培養(yǎng)基分裝于試管中，約是試管長(zhǎng)度的1／3,。瓊脂平板：將滅菌（或加熱融化）后的培養(yǎng)基冷至50℃左右,，以無(wú)菌手續(xù)傾人滅菌平皿內(nèi)，內(nèi)徑9cm的平皿傾注培養(yǎng)基約13～15ml,，輕搖平皿底醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理,，使培養(yǎng)基平鋪于平皿底部，待凝固后即成,，傾注時(shí),，切勿將皿蓋全部啟開，以免空氣中塵埃及細(xì)菌落入,。新制成的平板培養(yǎng)基（簡(jiǎn)稱平板）,，表面水分較多，不利于細(xì)菌的分離,，通常應(yīng)將平皿倒扣擱置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)約30分鐘待平板平面干燥后使用,。
6，滅菌：不同成分、性質(zhì)的培養(yǎng)基,，可采用不同的滅菌方法,。高壓蒸汽滅菌法：高壓滅菌的溫度與時(shí)間隨種類及數(shù)量的不同有所差別，一般少量分裝時(shí)高壓（103.43kPa）滅菌15分鐘即可,，分裝量較大時(shí),，可高壓（103.43kPa）滅菌30分鐘，含糖的培養(yǎng)基高壓（55.16kPa）滅菌15分鐘,。以免糖類被破壞,。
7，檢定：每批制成后須經(jīng)檢定方可使用,，檢定時(shí)將培養(yǎng)基放37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)后,，證明無(wú)菌，同時(shí)用已知菌種檢查在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖及生化反應(yīng)情況,，符合要求者方可使用,。
8，保存：制好的培養(yǎng)基,，不宜保存過(guò)久,，以少量勤做為宜。每批應(yīng)注明名稱,，分裝量,，制作日期等，放在4℃冰箱內(nèi)備用,。