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1,、傳代保存法

  有些微生物當(dāng)遇到冷凍或干燥等處理時(shí),，會(huì)很快死亡，因此在這種情況下,，只能求助于傳代培養(yǎng)保存法,。傳代培養(yǎng)就是要定期地進(jìn)行ATCC菌種轉(zhuǎn)接、培養(yǎng)后再保存,，它是基本的微生物保存法,，例如酸奶等常用菌種的保存。

  傳代保存時(shí),，培養(yǎng)基的濃度不宜過(guò)高,，營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低,。培養(yǎng)溫度通常以稍低于適生長(zhǎng)溫度為好,。若為產(chǎn)酸ATCC菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣,。

   一般地,，大多數(shù)菌種的保藏溫度以5℃為好，像厭氧菌,、霍亂弧菌及部分病原真菌等微生物菌種則可以使用37℃進(jìn)行保存,，而蕈類(lèi)等大型食用菌的ATCC菌種則可以室溫直接保存。

傳代培養(yǎng)保存法雖然簡(jiǎn)便，但其缺點(diǎn)也很明顯,，如：

① ATCC菌種管棉塞經(jīng)常容易發(fā)霉,；

② 菌株的遺傳性狀容易發(fā)生變異；

③ 反復(fù)傳代時(shí),，菌株的病原性,、形成生理活性物質(zhì)的能力以及形成孢子的能力等均有降低；

④ 需要定期轉(zhuǎn)種,，工作量大,；

⑤ 雜菌的污染機(jī)會(huì)較多。

2,、液體石蠟覆蓋保存法

  該法較前一種方法保存ATCC菌種的時(shí)間更長(zhǎng),，適用于霉菌、酵母菌,、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存,。此法可防止干燥，并通過(guò)限制氧的供給而達(dá)到削弱微生物代謝作用的目的,。

  其具有方法簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn),，同時(shí)也適用于不宜冷凍干燥的微生物(如產(chǎn)孢能力低的絲狀菌)的保存，而某些細(xì)菌如固氮菌,、乳酸桿菌,、明串珠菌、分枝桿菌,、紅螺菌及沙門(mén)氏菌等和一些真菌如卷霉菌,、小克銀漢霉、毛霉,、根霉等不宜采用此法進(jìn)行ATCC菌種保藏,。

3、懸液保存法

即使微生物混懸于適當(dāng)溶液中進(jìn)行保存的方法,。常用的有：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌,、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年,。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā),。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,，然后于冷暗處保存,，可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外,，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存,。

4,、冷凍干燥保存法

  它的原理是首先將微生物冷凍,，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分,。從菌體中除去大部分水分后，細(xì)胞的生理活動(dòng)就會(huì)停止,，因此可以達(dá)到長(zhǎng)期維持生命狀態(tài)的目的,。該方法適用于絕大多數(shù)微生物ATCC菌種(包括噬菌體和立克次氏體等)的保存。在進(jìn)行冷凍干燥時(shí),，需注意以下幾個(gè)問(wèn)題：

a. 冷凍干燥前的培養(yǎng)條件：首先檢驗(yàn)ATCC菌種純度,。一般地說(shuō)，將待保存的微生物在營(yíng)養(yǎng)豐富且容易增菌的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)為宜;菌齡以達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期為好;若為有芽孢或孢子的微生物,，則以芽孢和孢子形成以后進(jìn)行保存為好;菌液濃度以高為好,，如細(xì)菌應(yīng)達(dá)到109～1010/ml。

b. 菌株號(hào)碼等的標(biāo)記：可在安瓶外側(cè)標(biāo)記或在安瓶?jī)?nèi)封入標(biāo)簽,。

c. 安瓶的準(zhǔn)備：將安瓶在2%HCl中浸泡過(guò)夜,，自來(lái)水沖洗3次后，蒸餾水刷凈,，干燥,，塞棉塞，貼標(biāo)簽,，干熱滅菌或溫?zé)釡缇螅?0℃恒溫干燥,。

d. ATCC菌種添加保護(hù)劑：常用的保護(hù)劑有脫脂乳、12%蔗糖,、加7.5%葡萄糖的普通肉湯以及加7.5%葡萄糖的血清等等,。