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?ATCC菌種四種的保存方法
閱讀：1440 發(fā)布時間：2021-8-191,、傳代保存法
有些微生物當(dāng)遇到冷凍或干燥等處理時，會很快死亡,，因此在這種情況下,，只能求助于傳代培養(yǎng)保存法。傳代培養(yǎng)就是要定期地進(jìn)行ATCC菌種轉(zhuǎn)接,、培養(yǎng)后再保存,，它是基本的微生物保存法，例如酸奶等常用菌種的保存,。
傳代保存時,，培養(yǎng)基的濃度不宜過高,，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低,。培養(yǎng)溫度通常以稍低于適生長溫度為好,。若為產(chǎn)酸ATCC菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣,。
一般地,，大多數(shù)菌種的保藏溫度以5℃為好，像厭氧菌,、霍亂弧菌及部分病原真菌等微生物菌種則可以使用37℃進(jìn)行保存,，而蕈類等大型食用菌的ATCC菌種則可以室溫直接保存。
傳代培養(yǎng)保存法雖然簡便,，但其缺點也很明顯,，如：
① ATCC菌種管棉塞經(jīng)常容易發(fā)霉；
② 菌株的遺傳性狀容易發(fā)生變異,；
③ 反復(fù)傳代時,，菌株的病原性、形成生理活性物質(zhì)的能力以及形成孢子的能力等均有降低,；
④ 需要定期轉(zhuǎn)種,，工作量大；
⑤ 雜菌的污染機(jī)會較多,。
2,、液體石蠟覆蓋保存法
該法較前一種方法保存ATCC菌種的時間更長,，適用于霉菌,、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存,。此法可防止干燥,，并通過限制氧的供給而達(dá)到削弱微生物代謝作用的目的。
其具有方法簡便的優(yōu)點,，同時也適用于不宜冷凍干燥的微生物(如產(chǎn)孢能力低的絲狀菌)的保存,，而某些細(xì)菌如固氮菌、乳酸桿菌,、明串珠菌,、分枝桿菌、紅螺菌及沙門氏菌等和一些真菌如卷霉菌,、小克銀漢霉,、毛霉、根霉等不宜采用此法進(jìn)行ATCC菌種保藏,。
3,、懸液保存法
即使微生物混懸于適當(dāng)溶液中進(jìn)行保存的方法,。常用的有：
① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年,。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
② 糖液保存法：適用于酵母菌,，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,，然后于冷暗處保存，可長達(dá)10年,。除此之外,，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。
4,、冷凍干燥保存法
它的原理是首先將微生物冷凍,，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分。從菌體中除去大部分水分后,，細(xì)胞的生理活動就會停止,，因此可以達(dá)到長期維持生命狀態(tài)的目的。該方法適用于絕大多數(shù)微生物ATCC菌種(包括噬菌體和立克次氏體等)的保存,。在進(jìn)行冷凍干燥時,，需注意以下幾個問題：
a. 冷凍干燥前的培養(yǎng)條件：首先檢驗ATCC菌種純度。一般地說,，將待保存的微生物在營養(yǎng)豐富且容易增菌的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)為宜;菌齡以達(dá)到對數(shù)生長期為好;若為有芽孢或孢子的微生物,，則以芽孢和孢子形成以后進(jìn)行保存為好;菌液濃度以高為好，如細(xì)菌應(yīng)達(dá)到109～1010/ml,。
b. 菌株號碼等的標(biāo)記：可在安瓶外側(cè)標(biāo)記或在安瓶內(nèi)封入標(biāo)簽,。
c. 安瓶的準(zhǔn)備：將安瓶在2%HCl中浸泡過夜，自來水沖洗3次后,，蒸餾水刷凈,，干燥，塞棉塞,，貼標(biāo)簽,，干熱滅菌或溫?zé)釡缇螅?0℃恒溫干燥。
d. ATCC菌種添加保護(hù)劑：常用的保護(hù)劑有脫脂乳,、12%蔗糖,、加7.5%葡萄糖的普通肉湯以及加7.5%葡萄糖的血清等等。