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介紹生物素親和素ELISA系統(tǒng)
閱讀：666 發(fā)布時間：2021-7-1生物素親和素(又稱抗生物素)系統(tǒng)(biotin avidin system,BAS)標記抗體的技術是20世紀70年代后期發(fā)展起來的一種新的免疫檢測方法,。由于親和素與生物素間的親和力*,，結合迅速,，且極其穩(wěn)定,，生物素標記抗體和酶的標記率高，又不影響蛋白的活性,，使BAS標記技術比常規(guī)酶聯(lián)免疫,、放射免疫及熒光免疫技術有著更高的靈敏度，為微量抗原,、抗體的檢測開辟了新的途徑,。近年來，在BAS檢測中多用鏈霉親和素“streptavidin,SA”,，它是鏈霉菌培養(yǎng)過程中的分泌物,，完整的鏈霉親和素和從卵白中提取的親和素一樣，也由4條相同的肽鏈組成,。因鏈霉親和素在檢測應用中發(fā)生的非特異性結合遠較親和素低,，因此日漸受重視，已有取代親和素之勢,。
原理
生物素或親和素與抗體分子或標記物結合后,，既不影響前者的親和力，也不改變后者的特性,。親和素分子的4個活性部位并非都和連接在抗體分子上的生物素殘基結合,，剩下的游離部位尚可作為另一種生物素標記蛋白質的受體。這些特點就是BAS免疫標記技術的基礎和原理,。
BAS基本檢測方法可分為兩大類,，一類以游離親和素居中，分別連接生物素化大分子反應體系和標記生物素,，稱為BAB法或橋聯(lián)親和素生物素法(bridged avidin biotintechnique,BRAB),，其改良法稱為(avidin biotin complex,ABC)法。另一類以標記親和素連接生物素化大分子反應體系,，稱為BA法或標記親和素和生物素法(LAB)?，F(xiàn)分別介紹如下：
1.BA法亦稱LBA法。系將特異性抗體生物素化,，將酶分子標記在親和素分子上,，生物素化抗體與被檢抗原結合后,，再借BAS的高度親和力將酶分子聯(lián)結到抗原分子上，經酶促反應即可檢出抗原,。
2.BAB法亦稱BRAB法,。系將特異性抗體生物素化，將酶分子標在生物素上,，然后以游離親和素橋聯(lián)物，使被檢抗原,、生物素化抗體和酶標生物素聯(lián)成一體,。
3.ABC法原理與BAB法基本相同，只是親和素和酶標生物素需要先按一定比例形成ABC復合物,，這種網絡結構結合了大量的酶分子,，當親和素尚未被酶標生物素飽和時，生物素化抗體即可與之結合,。
以上便是BAS ELISA的三種基本檢測法,。上述方法中，如將第二抗體生物素化,，即為間接法,。由于間接法增加了一級抗原抗體反應，因而比直接法更敏感,，應用范圍更廣,。近年來許多學者對上述基本方法進行了改良，有人用親和素抗體或A蛋白作橋聯(lián)物,。另外還發(fā)展了BA ELISA競爭法和抑制法等,。
各種抗體或酶的標記物在國內已有商品供應，使用方便,。BAS ELISA具有的特點：
①對于所有的抗原抗體系統(tǒng),，包括免疫細胞化學、ELISA,、免疫印跡法等都適用,，應用范圍極廣；
②BAS在溫和條件下可與各類生物大分子如蛋白質,、脂多糖等結合,，并且這種結合對原生物大分子的生物活性無影響；
③每個親和素分子可與4個生物素分子結合,，所以可以偶合更多連接生物素的酶分子,，從而大大提高了靈敏度；
④生物素和親和素間親和力強,，故二者一旦結合,，就極為穩(wěn)定,，不受在ELISA方法中的保溫及多次洗滌影響，而且這種結合反應時間比抗原抗體反應所需時間短,；
⑤結果專一性強,，非特異性顯色或染色背景極低；
⑥第一抗體稀釋度高,，可節(jié)約抗體,。