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細(xì)胞培養(yǎng)的操作步驟
閱讀：394 發(fā)布時(shí)間：2021-6-9一、準(zhǔn)備工作
準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗,、干燥與消毒,，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,，無菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒,，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試等。
二,、取材
在無菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞,，經(jīng)過一定的處理后接入培養(yǎng)器血中，這一過程稱為取材,。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無取材這一過程,。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的第一次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。理論上講各種動(dòng)物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng),，實(shí)際上幼體組織比成年個(gè)體的組織容易培養(yǎng),，分化程度低的組織比分化高的容易培養(yǎng)，腫瘤組織比正常組織容易培養(yǎng),。取材后應(yīng)立即處理,，盡快培養(yǎng)，因故不能馬上培養(yǎng)時(shí),，可將組織塊切成黃豆般大的小塊,，置4℃的培養(yǎng)液中保存。取組織時(shí)應(yīng)嚴(yán)格保持無菌,，同時(shí)也要避免接觸其他的有害物質(zhì),。取病理組織和皮膚及消化道上皮細(xì)胞時(shí)容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理,。
三,、培養(yǎng)
將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng),，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部,，幾個(gè)小時(shí)后組織塊可貼牢在底部，再加入培養(yǎng)基,。如系細(xì)胞培養(yǎng),，一般應(yīng)在接入培養(yǎng)器皿之前進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，按要求以一定的量（以每毫升細(xì)胞數(shù)表示）接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基,。細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)器皿后,，立即放入培養(yǎng)箱中,，使細(xì)胞盡早進(jìn)入生長狀態(tài)。
正在培養(yǎng)中的細(xì)胞應(yīng)每隔一定時(shí)間觀察一次,，觀察的內(nèi)容包括細(xì)胞是否生長良好,，形態(tài)是否正常，有無污染,，培養(yǎng)基的PH 是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示）,，此外對(duì)培養(yǎng)溫度和CO2 濃度也要定時(shí)檢查。
一般原代培養(yǎng)進(jìn)入培養(yǎng)后有一段潛伏期,，在潛伏期細(xì)胞一般不分裂，但可貼壁和游走,。過了潛伏期后細(xì)胞進(jìn)入旺盛的分裂生長期,。細(xì)胞長滿瓶底后要進(jìn)行傳代培養(yǎng)，將一瓶中的細(xì)胞消化懸浮后分至兩到三瓶繼續(xù)培養(yǎng),。每傳代一次稱為“一代",。二倍體細(xì)胞一般只能傳幾十代，而轉(zhuǎn)化細(xì)胞系或細(xì)胞株則可無限地傳代下去,。轉(zhuǎn)化細(xì)胞可能具有惡性性質(zhì),，也可能僅有不死性而無惡性。培養(yǎng)正在生長中的細(xì)胞是進(jìn)行各種生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)的良好材料,。