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細胞培養(yǎng)的操作步驟
閱讀：412 發(fā)布時間：2021-6-9一、準(zhǔn)備工作
準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗,、干燥與消毒,，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒,，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試等,。
二、取材
在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細胞,，經(jīng)過一定的處理后接入培養(yǎng)器血中,，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養(yǎng)則無取材這一過程,。機體取出的組織細胞的第一次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng),。理論上講各種動物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng)，實際上幼體組織比成年個體的組織容易培養(yǎng),，分化程度低的組織比分化高的容易培養(yǎng),，腫瘤組織比正常組織容易培養(yǎng)。取材后應(yīng)立即處理,，盡快培養(yǎng),，因故不能馬上培養(yǎng)時，可將組織塊切成黃豆般大的小塊,，置4℃的培養(yǎng)液中保存,。取組織時應(yīng)嚴格保持無菌，同時也要避免接觸其他的有害物質(zhì),。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌,，為減少污染可用抗菌素處理。
三,、培養(yǎng)
將取得的組織細胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng),。如系組織塊培養(yǎng)，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部,，幾個小時后組織塊可貼牢在底部,，再加入培養(yǎng)基。如系細胞培養(yǎng),，一般應(yīng)在接入培養(yǎng)器皿之前進行細胞計數(shù),，按要求以一定的量（以每毫升細胞數(shù)表示）接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細胞進入培養(yǎng)器皿后,，立即放入培養(yǎng)箱中,，使細胞盡早進入生長狀態(tài)。
正在培養(yǎng)中的細胞應(yīng)每隔一定時間觀察一次,，觀察的內(nèi)容包括細胞是否生長良好,，形態(tài)是否正常，有無污染,，培養(yǎng)基的PH 是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示）,，此外對培養(yǎng)溫度和CO2 濃度也要定時檢查。
一般原代培養(yǎng)進入培養(yǎng)后有一段潛伏期，在潛伏期細胞一般不分裂,，但可貼壁和游走,。過了潛伏期后細胞進入旺盛的分裂生長期。細胞長滿瓶底后要進行傳代培養(yǎng),，將一瓶中的細胞消化懸浮后分至兩到三瓶繼續(xù)培養(yǎng),。每傳代一次稱為“一代"。二倍體細胞一般只能傳幾十代,，而轉(zhuǎn)化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去,。轉(zhuǎn)化細胞可能具有惡性性質(zhì)，也可能僅有不死性而無惡性,。培養(yǎng)正在生長中的細胞是進行各種生物醫(yī)學(xué)實驗的良好材料。